灰树花深层发酵多糖、提取纯化及抗氧化作用研究-生物化工专业论文.docxVIP

顾广州灰树花深层发酵多糖、提取及其抗氧化活性研究 顾广州灰树花深层发酵多糖、提取及其抗氧化活性研究 5 事两 要 灰树花(6rifolafrondosa)是担子菌亚门、层菌纲、无隔担子菌亚纲、非褶菌目、 多孔菌属中的一种大型药食用真菌，其子实体富含氨基酸、多糖、微量元素等多 种营养成份。灰树花多糖有调节免疫力、抗肿瘤、治疗糖尿病、改善体内脂肪代 谢及抗氧化等多种生物学功效。目前对灰树花深层发酵多糖的研究还比较少；本 文研究了灰树花液态发酵，优化了发酵培养基组成，并进行扩大培养；通过不同 的提取方式提取灰树花菌丝体多糖：灰树花多糖纯化、结构信息的表征；多糖的 抗氧化作用的研究。研究结果如下： 1．通过单因素试验确定了灰树花液态发酵培养基的碳源和氮源种类，筛选出 对灰树花多糖合成影响显著的三个培养基组分为：葡萄糖，酵母粉和菜籽油。响 应面分析结果表明，在培养基组成为葡萄糖27．1 59／L，酵母粉5．99／L和菜籽油 3．669／L时，获得最大菌丝体量4．93 g／L而在培养基组成为葡萄糖25．859／L，酵 母粉5．569／L和菜籽油3．349／L时，最大胞外多糖量为1．89 g／L。在优化培养基组 成的条件下5 L发酵罐扩大培养，扩大培养后的菌丝体产量最大值达5．59／L，胞外 多糖量最大值2．1 g／L，大于优化前菌丝体的产量。 2．对灰树花菌丝体多糖提取进行了研究，探讨了热水、超声及微波法提取灰 树花多糖的工艺。研究三种提取工艺的料水比、提取时间、提取温度等因素对灰 树花菌丝体多糖提取率的影响。在单因素的基础上，对热水提取、超声提取及微 波提取法正交试验优化。结果显示热水提取条件为料水比为1：15，时间为4h，温 度为95℃时，提取率达到最大为3．98％。超声提取条件为料水比为1：l 0，时间为 45min，温度为70℃时，提取率达到最大为4．36％。微波提取条件为料水比为1：20， 时间为12min，功率为600W时，提取率达到最大为4．74％。对比三种提取工艺可 以看出采用微波提取灰树花菌丝体多糖的提取率最高。 3．通过水提、脱蛋白、透析、醇沉，DEAE．52及Sephadex G．75层析方法从 灰树花菌丝体中获得多糖GFP I-I，以及灰树花深层发酵的胞外多糖组分 WGFP I．I。经GC分析灰树花多糖GFP I．I、胞外多糖组分WGFP I．I以葡萄 糖为主要单糖组分。紫外可见光谱、红外光谱、气相色谱及核磁对灰树花多糖的 一级结构的基团及它的一些结构特点的分析表明，多糖GFP I．I可能的结构为 【Q．D．Glc(1---*4)．】n型葡聚糖，平均分子量为7．3×1 04；多糖WGFP I．I可能的结构 为[o【-D-Glc(1_4)一]n型葡聚糖，并且有[q-Gle(1---*3)．]n支链结构，平均分子量为 5．66x104。 4．分别对灰树花菌丝体多糖和胞外多糖体外、体内抗氧化试验，研究多糖的 还原力、DPPH‘体系中的抗氧化性、清除超氧阴离子和羟基自由基能力，以及体内 6 6 扬州大学硕士学位论文 抗D．半乳糖诱导小鼠衰老试验。结果表明灰树花多糖随着浓度的增大还原力增强； 灰树花菌丝体多糖浓度达到0．4mg／mL时其清除02’。的能力达到80％，胞外多糖浓 度达到0．4mg／mL时其清除02“的能力达到90％。灰树花菌丝体、胞外多糖浓度为 1．0mg／mL时其抑制羟基自由基大小为70％。多糖对DPPH·的清除能力随着多糖浓 度的升高有增大的趋势，特别是菌丝体多糖，当浓度达到1．0mg／mL时，清除 DPPH·的能力达到了67％。小鼠体内实验表明，与模型组相比，灰树花菌丝体多糖 及胞外多糖可以显著提高脑、肝、心脏组织和血清中T-AOC、GSH．Px、SOD活性 (P0．05)，尤其以胞外多糖更为显著；同时灰树花多糖可以显著降低肝脏、心脏 组织和血清中MDA含量(P0．01)，对脑组织则没有明显效果。 关键词：灰树花多糖；发酵；提取；抗氧化 顾广州灰树花深层发酵多糖、提取及其抗氧化活性研究 顾广州灰树花深层发酵多糖、提取及其抗氧化活性研究 7 Abstract Grifola frondosa is a large drug edible fungus，belonging to the the phylum Basidiomycotina，class layer Basidiomycetes，order Aphyllopherales and family Polyporeceae．Its fruiting body contai