梅毒讲义牛磊讲述说明.pptVIP

非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 非特异 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) 黑 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 红 性病研究实验室试验 (VDRL) 神经梅毒 实验模拟 ?窗口期 ?前带现象 ?生物学假阳性 ?血清固定 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 在卡片的一个圆圈内加入50ul血清，同样加入阳性及阴性对照 仪器： 水平旋转仪转速？转幅？ 定性试验 加 试剂量1 滴= = ？ ul 水平 旋转仪旋转时间？ 28用小棒将血清和对照均匀涂开铺散盖满整个圆环的表面，注意不能溢出圈外，试剂室温预温30分钟，将抗原轻轻摇匀，吸取17ul抗原液加到每一个圆圈。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 定性试验（TRUST为例） （1）反应：将卡片置水平旋转仪上， 转速：100±2 r/min， 转幅2cm，旋转8分钟 （2）在亮光下用肉眼观察结果 滴度相差两个滴度才有临床意义 切勿使用振荡器 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 1.根据需要确定稀释度，1:1（原血）,1:2,1:4顺延，在反应板的每个圆环上加上1滴50ul0.9%的生理盐水，勿将盐水涂开 2在第一个圆环内加入50ul血清，用加样枪来回吸放5-6次（避免气泡形成），然后将混合液50ul加入第二个圆环，重复操作至需要稀释度,最后一个圆环中50ul混合液弃去 3.从最高稀释度开始，将不同稀释度的标本均匀涂布整个圈内，不同患者血样的混合棒不能混用， 4.在每个圆圈内加入恢复至室温的轻轻混匀的抗原17ul 非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点 *定量试验-定量试验血清稀释不需要使用试管,定量试验原倍血清滴度为1:1 非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义 非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义 隐性梅毒 一般滴度1:8 但不排除1 :8 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 TPPA 阳性 TRUST 原倍阴性需稀释 排除前带反应 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点 梅毒螺旋体抗原血清学检测 特异 梅毒免疫层析法快速检测 (RT) TP重组抗原 梅毒酶联免疫吸附试验（ （ELISA） ） TP重组抗原 发光免疫分析法（ （CLIA） ） TP重组抗原 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 金标准 TP 荧光螺旋体抗体吸收试验（ （FTA-ABS） ） TP 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（ （WB） ） TP 梅毒IgM抗体检测 抗体检测（ （IgM） ） 早期TP先天TP神经TP 梅毒螺旋体抗原血清学试验原理 TPPA ★TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性 ★试剂抗原：nichols株精制菌体成分 ★TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准 FTA-ABS试验 以完整形态的Nichol 梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter 株螺旋体制备而成）处理过的患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FITC）标记的抗人免疫球蛋白，与血清梅毒螺旋体抗体结合。在荧光显微镜下，螺旋体显示苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 梅毒螺旋体表面抗原、类属抗原与非致病性密螺旋体间有交叉反应，吸收剂可排除影响。 FTA-ABS试验是检测梅毒的经典“金标准”试验。 唯一排除了其他螺旋体干扰的实验 操作繁琐，成本高，不适用于常规实验室 TP—ELISA试验原理 TP—ELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。 本法可用于大样本血清检测。 试剂抗原： TP基因重组抗原TP17、47、15、42.5分区抗原 不能区分IgG与IgM抗体，导致它们检测敏感性增加。 化学发光法的临床应用基本同ELISA TP-RT 试 验 原 理 以硝酸纤维素膜为载体，将重组的梅毒螺旋体抗原固定在膜上，待检标本（如血清）与标记的特异性抗原结合并沿着固相载体迁移，并显示出有色条带。 本法快速、简便； 可疑结果可用TPPA或其他方法进行重复试验。 梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义 梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义 梅毒螺旋体抗原血清学实验特点 梅毒螺旋体抗原血清学实验特点 HIV感染者的梅毒血清学检测 在HIV感染的早期，机体免疫力尚正常，由于激活了B细胞使反应性增强，梅毒非特异性抗体滴度往往增高，甚至出现假阳性反应。 在HIV感染的晚期，由于机体免疫力明