光动力疗法对血管内皮细胞和视网膜色素上皮细胞的影响-眼科学专业论文.docxVIP

功率密度为600mw／cm2的二极管激光)，能量密度为2．4J／cm2，用MTT法检测 功率密度为600mw／cm2的二极管激光)，能量密度为2．4J／cm2，用MTT法检测 24小时后各处理组细胞的存活率。2．按照上述方法分组行PDT，用流式细胞仪 检测3小时后各处理组细胞的凋亡比例。3．按上述方法分组行PDT后，通过光 镜观察各组细胞在PDT后24小时的形态学改变特征，并通过电镜检查，观察细 胞的超微结构改变。4．两种细胞按上述方法分组，与浓度为20ug／ml的verteporfin 分别共同孵育不同的时间(0min、5min、15rain、30min、60min、120rain)后， 用50％的甲醇萃取进入细胞内的光敏剂verteporfin，用荧光分光光度计分别测量 各组细胞内verteporfin含量。 研究结果：1、PDT后24小时，RPE细胞在0min组、5min组、15min组、30min 组、60rain组和120min组的细胞平均存活率分别为：O．94±0．07、0．68±0．13、 0．68±0．11、0．65±0．12、O．49±0．11和021±0．11，细胞的存活率随与光敏剂孵 育时间的延长而下降，经单因素方差分析，不同时间组的细胞存活率有显著性差 异(辟0．000)，S-NKQ检验，5min组、15min组、30min组、60min组、120min 组与0min组比较都有统计学差异；血管内皮细胞在上述各时间组的平均存活率 分另0为：1．02±0．05、O．78±0．08、O．71±0．11、0．69±0．08、0．62±0．09和0．23± 0．11，细胞的存活率随孵育时间的延长而下降，经单因素方差分析，不同时问组 的细胞存活率有显著性差异(P=-0．000)，S-NKQ检验，5min、15min、30min、 60min、120min组与0min组比较都有统计学差异；PDT后两种细胞在相同时间 组的细胞存活率经r检验均无统计学差异(PO．5)。2、PDT后3小时流式细胞 仪检查细胞凋1i：比例，RPE细胞在0min组至120rain组的凋亡比例分别为：O．02 ±0．0l、0．22±0．Ol、0f3l±0．02、0．38±0．03、0．47±0．05和0．58±0．03；血管内 皮细胞各组的凋亡比例分别为：O．01±0．01、O．25±0．02、O．32+0．02、O．41±0．04、 O．49+0．03和0．61±O．02；两种细胞的凋亡比例均随着细胞与光敏剂孵育时间的 延长而增加；两种细胞在相同时间组的凋亡比例经r检验无显著差异性fPO．05)。 3、PDT后24小时形态学观察发现，两种细胞0min组细胞彤态基本正常，5min 组、15分钟组和30min组以凋亡样改变为主，60min组和120min组均出现不同 程度的坏死改变，细胞损害的形态学改变随孵育时间的延长损害改变加重。4、 荧光分光光度计测量，RPE细胞在0min组、5min组、 15min组、 30min组、 60rain组和120min组的每106个细胞内verteporfin含量分别为：0ug、0．1±0．0lug、 Il o．26+0．0lug、o．42±O．02ug、O．52+0．02ug和O．53±0．03ug；血管内皮细胞在0min组、5min组、 o．26+0．0lug、o．42±O．02ug、O．52+0．02ug和O．53±0．03ug；血管内皮细胞在0min 组、5min组、 15min组、30min组、60min组和120min组每106细胞内 verteporfin含景分别为：0ug、0．12±O．0lug、0．31±O．02ug、0．46-t-0．0lug、0．55 ±0．03ug和0．58±0．02ug；两种细胞在相同时间点的吸收量经7检验没有显著差 异(P0．05)。 结论：PDT在体外对人RPE细胞和血管内皮细胞均有快速地杀伤作用，两种细 胞对PDT有相似的敏感性，这与两种细胞对光敏剂的吸收作用基本一致有关； 两种细胞PDT后均可出现凋亡和坏死两种改变，损伤程度与细胞暴露在光敏剂 下的时间成正相关。 关键词：光化学疗法、 色素上皮、 血管内皮、 细胞活力、 凋亡 IU The The effect of photodynamic therapy on vascular endothelial cells and retinal pigment epithelial cells Major：Ophthalmology Nalne：Zhou Shaobo Supervisor：Jin Chenjin ABSTRACT Age—related macular degeneration(AMD)is