猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RTPCR检测方法.pdfVIP

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 MA T/CVMA 12—2018 猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光 RT-PCR 检测方法 Real-Time RT-PCR for detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus 2018 - 10 - 24 发布 2018 - 10 - 24 实施 中 国 兽 医 协 会 发 布 T/CVMA 12—2018 前 言 本标准按 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国兽医协会提出并归口。 本标准起草单位：中国动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：周智、王传彬、杨林、吴佳俊、宋晓晖、翟新验、倪建强、刘玉良、张硕、刘 颖昳、赵柏林、顾小雪、曲萍。 I T/CVMA 12—2018 猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR 检测方法 1 范围 本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）通用型实时荧光RT-PCR诊断技术、鉴别美洲型和 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR诊断技术。 本标准主要用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 25172 猪常温精液生产与保育技术规范 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范执行 3 试剂与耗材 3.1 RNA 提取试剂 RNA提取试剂详见附录A，或选取商品化的病毒RNA提取试剂盒。 3.2 其他试剂 Taq DNA聚合酶（5 U/µL），PrimeScriptTM RT Mix Ⅱ反转录酶混合物，50×ROX Reference Dye Ⅱ, 2×One Step RT-PCR BufferⅢ缓冲液， 无水乙醇，无菌无核酸酶水，生理盐水。 3.3 引物探针 3.3.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒 （PRRSV）通用型实时荧光 RT-PCR 引物和探针，见表 1。 表1 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）通用型实时荧光RT-PCR 引物和探针序列 名称 序列（5＇-3＇） 美洲型上游引物 （NAF） TGGARATTCATCACCTCCAGR 美洲型下游引物 （NAR） GTGCCGTTRACCGTAGTGGA 欧洲型上游引物 （EUF） ACTTCCAGATGCAGATTGTGT 欧洲型下游引物 （EUR） GCCGTTCACTGATGTTAGTCC 探针 FAM-TACATTCTGGCCCCTGCCCAYCA-BHQ 注：将表中引物和探针用无菌无核酸酶水稀释至10pmol/µL