slc38a3通过激活akt信号通路诱导emt促进非小细胞肺癌的转移病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

目 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 ．．1 (二)英文摘要 ．．4 二、正文 ．8 (一)前言(一)碍|J舌 西8 第一部分SLC38A3对非小细胞肺癌EMT的影响 (二)材料与方法 13 l材料 ．．13 2方法 ．．16 (三)实验结果 ．．30 (四)讨论 ．．37 (五)结论 39 第二部分SLC38A3激活AKT信号通路促进转移的机制 (二)材料与方法 ．．40 l材料 ．．40 2方法 ．4 l (三)实验结果 42 (四)讨论 44 (五)结论 ．．46 (六)参考文献 47 万方数据 三、综述 三、综述 ．．49 (一)综述 49 (二)参考文献 ． ．．53 四、致谢 ．．56 万方数据 大连医科大学硕士学位论文 大连医科大学硕士学位论文 SLC38A3通过激活Akt信号通路诱导EMT 促进非小细胞肺癌的转移 研究生姓名：付莅 指导教师：李墨林教授 专业名称：病理学与病理生理学 摘要 研究目的： 1．了解溶质载体转运蛋白SLC38A3在非小细胞肺腺癌肿瘤组织和非小细胞 肺癌细胞株中的表达情况。 2．研究溶质载体转运蛋白SLC38A3促进非小细胞肺癌转移的机制。 研究背景： 肺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，其死亡率是恶性肿瘤总死亡率 的1／4，高居于首位。随着全球环境日益恶化，许多城市出现雾霾杀手，肺癌的发 病率更是持续增长，且有明显的年轻化趋势，而且肺癌极容易发生转移。肺癌按 照临床特征分为小细胞肺癌(Small cell carcinoma,SCLC)和非小细胞肺癌 (Non．small．cell carcinoma，NSCLC)，前者仅占15％，而5年生存率极低的非小 细胞肺癌占了总肺癌的85％。非小细胞型肺癌极易转移到一些血供丰富的重要组 织器官，如脑、肝、脊柱等。肿瘤转移是一个极为复杂的过程，目前有研究认为 上皮．间质转化(Epithelial．mesenchymal transition，EMT)在肿瘤转移过程中发挥着 重要作用。EMT是一个多转录因子参与的复杂过程，参与其中的信号通路主要有 依赖Smad和非依赖Smad的TGF—p通路、AKT信号通路、STAT3信号通路等等。 将EMT的机制研究清楚，可以通过这些信号通路阻断EMT进程，从而防止肿瘤 转移。 SLC38家族是人溶质载体家族(Solute Carrier Family)中第38号家族，是一 类Na耦联中性氨基酸转运的蛋白家族，共有11个成员，其中SLC38A3主要位于 细胞膜上，可依赖Na+禾I H+进行双向跨膜运输，主要转运谷氨酰胺、组氨酸、丙 万方数据 大连医科大学硕士学位论文氨酸、天冬酰胺等。由于肿瘤细胞具有快速、无限增长的特性，其对营养物质的 大连医科大学硕士学位论文 氨酸、天冬酰胺等。由于肿瘤细胞具有快速、无限增长的特性，其对营养物质的 需求也不同于正常细胞。目前研究认为，许多肿瘤细胞可以通过改变代谢方式和／ 或增加对谷氨酰胺的依赖性从而为自身的生长提供原料。SLC38A3是一种谷氨酰 胺转运蛋白，其特殊的氨基酸转运方式提示它在氮代谢和传递过程中具有重要作 用。了解SLC38A3在非小细胞肺癌中的表达情况及其与肺癌的相关性具有重要的 临床临床意义，明确其在非小细胞肺癌发生发展中的作用机理可为进一步寻找非 小细胞肺癌治疗的靶点提供依据。 研究方法： 组织芯片免疫组化检测临床非小细胞肺癌组织中SLC38A3的表达；Western Blot检测非小细胞肺癌细胞株中SLC38A3的表达；网站分析SLC38A3表达与肺 癌病人生存期的关系；构建肺癌细胞Hcc827的SLC38A3过表达稳转细胞系；质 谱分析技术分析SLC38A3过表达后细胞内其转运氨基酸的变化；Western Blot检 测SLC38A3过表达对EMT标志蛋白的变化；对细胞形态观察、划痕实验和 transwell实验等研究过表达SLC38A3对非小细胞肺癌生物学行为的影响；进一步 通过Western Blot检测过表达SLC38A3对肿瘤细胞EMT信号通路的影响。 实验结果： 我们用组织芯片检测了75例临床肺腺癌病人肿瘤组织中SLC38A3的表达情 况，结果发现与癌旁对照组织相比，所有肿瘤组织中SLC38A3的表达均明显上调， 差别有显著的统计学意义p=0．0088)，并且SLC38A3在原位肺癌病人癌组织中的表 达量灰度值125．226+20．3725，而在III级肺癌病人体内表达量灰度值为 184．7093+17．6235，差别有统计学意义p=0．0097)。通过Kaplan Meier plotter网站分 析发现：SLC38A3低表达组肺癌病人100个月生存概率为0．553，200个月生存概 率为0．357，而高表达组1