毒性中药钩吻配伍玉叶金花减毒机制研究中西医结合基础专业论文.docxVIP

2．3数据统计分析 2．3数据统计分析 ．．13 3结果 ．． 13 3．1对小鼠扭体实验的影响 13 3．2对小鼠热板实验的影响 13 3．3对福尔马林致痛实验的影响 ．．15 4讨论 ．． ． ．．．．．．．．．．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．．．15 小结 ．．． ．． ．．．． ．．． ．．．．． ．．．．．15 第二部分钩吻配伍前后对药物转运的影响 1 7 l引言 ．．． ．．．．． ．．． ． ．．．． ． 17 2实验路线图 ．．17 实验一钩吻毒／效部位转运前成分稳定性分析 ．．1 8 l材料．．．．． ． ． ．．． ．18 1．1实验仪器 ． ．．18 1．2实验试剂 18 1．3实验药材 ．．． ． ． ． ． ．．19 2方法 ．． ．． ． ．． ．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19 2．1钩吻毒／效部位的制备 ． ．． ． ．． ．19 2．2钩吻毒／效部位稳定性分析 19 2．3钩吻毒／效部位的UPLC—MS／MS分析 ． ． ．．． ．．19 3结果 ．． ．．． ．．．． ．．．．．． ．．20 3．1钩吻毒／效部位稳定性分析 20 3．2钩吻毒／效部位的UPLC—MS／MS分析 ．． ． ．21 4讨论 ． ． ．． ．．．．．． ．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．． ．23 实验二钩吻配伍前后在Caco-2细胞中的转运机制研究 ．．25 1材料 ．．25 1．1实验仪器 ． ．． ． ． ．25 1．2实验试剂 25 1．3实验药材．．．．． ．．． ．．．．． ．．． ．．26 1．4细胞 ． ．． ． 26 1．5主要试剂的配制 26 2方法 ． ．． ．．26 2．1 Caco-2细胞的培养． ． ． ．26 2．2 MTT法检测试药细胞毒性 ．．26 2．3钩吻配伍前后跨膜转运机制研究 ．27 2．4数据统计分析 ． ．28 3结果．．．．．． ．． ． ．． ．．． ．． ．． ．．．．．．．．28 3．1 Caco-2细胞模型的评判 ． ．． ．． ．28 3．2 MTT法检测试药细胞毒性 ．．28 TTT 万方数据 3．3跨膜转运机制研究 3．3跨膜转运机制研究 ．29 4讨论 ．．34 小结 ．．．．． ．．．．．． ．．．． ．．．． ． ． ．34 第三部分钩吻配伍前后对药物转化的影响 37 1引言．． ．． ．．． ．．．． ．．．．．．． ． ． 37 2实验路线图 ．．． ．．．．．．． ．．． ． ．． ． ．．．37 实验一钩吻配伍前后对I相代谢的影响 38 1材料 ．．38 1．1实验仪器 38 1．2实验试剂 38 1．3实验药材 39 1．4实验动物 40 2方法 ．． 40 2．1药物的制备 ． 40 2．2分组与给药 ．．． ． 40 2．3样品的处理 ．40 2．4 RT-PCR法测定肝脏组织中基因CYP2EI、CYPIA2 mRNA的表达 ．40 2．5 WesternBlot法测定肝脏组织中CYP2EI、CYPIA2蛋白含量 42 2．6免疫组化测定肝脏组织中CYP2EI、CYPIA2蛋白的表达 44 2．7数据统计分析 ． ．． ．．45 3结果．．．．．． ．． ． ． ．． ．． ．． ．． ．．．．． 45 3．1肝组织中基因CYP2EI、CYPIA2 mRNA的表达 ．． ．45 3．2肝组织中CYP2E1、CYPIA2蛋白的表达 ．．46 4讨论 ．．50 实验二钩吻配伍前后对Ⅱ相代谢的影响 52 1材料 ．．52 1．1实验仪器 52 1．2实验试剂 52 1_3实验药材 53 1．4实验动物 ．． ．． ．． ． ．． 53 2方法 ．．53 2．1药物的制备 ．53 2．2分组与给药 ．． ．．． ．．． ．．54 2．3样品的处理 ．． ．．．． ．．． ． 54 2．4 RT-PCR法测定肝脏组织中基因GST—pi、GSTml mRNA的表达 ．．54 2．5 WesternBlot法测定肝脏组织中GST—pi、GSTml蛋白含量 ．55 2．6肝脏组织中GST酶活力测定 ．．55 TV 万方数据 2．7数据统计分析 2．7数据统计分析 ． ．55 3结果 ．． ． ．．．．．． ．． ． ．．55 3．1肝组织中基因GST-pi、GSTml mRNA的表达 ． ．．．55 3．2肝组织中GST-pi、GSTml蛋白的表达 57 3．3肝组织中GST酶活力测定 ．58 4讨论 ． ．．．． ． ．．．． ．．．．．． ．．．． 59 小结 ．． ． ．． ．．60 结 论 。6 1 参考文献 62 致谢