端粒与端粒酶在硼替佐米和arid1a抑制肿瘤进展中的功能学研究肿瘤学专业论文.docxVIP

CATALOGUEABSTRACT(in CATALOGUE ABSTRACT(in Chinese) ． ． 1 ABSTRACT(in English) ． ”5 Abbreviations 一9 Part I：Bortezomib．mediated down．regulation of telomerase and disruption of telomere homeostasis contributes to apoptosis of malignant cells 111troduction ．．1 1 Materials and methods 1 5 Resuit ．．33 Discussion ．38 Conclusion 41 Tables and figures -42 R-ef．crences ．50 Part II：Chromatin remodeling factor ARIDlA suppressed the development of gastric cancer by targeting hTERT mtroduction ．．58 l订aterl‘als and methods 62 Result ．．69 Discussion ．71 Conclusion 73 Tables and figures ． 74 R-efbrences ．78 Acknowledgement ． ． · 87 Published papers 88 Paper evaluation table 89 English paper 一91 万方数据 山东大学博士学位论文中文摘要 山东大学博士学位论文 中文摘要 端粒与端粒酶在硼替佐米和AR I D1 A 抑制肿瘤进展中的功能学研究 博士研究生：慈新宇 导师：徐大为教授 专业：肿瘤学 研究背景 端粒是位于真核染色体末端，由短的DNA重复序列TTAGGG和相关蛋白质组 成的复合物。其主要作用是保护染色体，既可防止染色体被核酸酶降解，同时又 能阻止相邻染色体间的融合。另外，端粒的长度反应细胞的可分裂次数，因此， 被称为细胞的“生命钟”。正常情况下，端粒DNA会随着细胞的每次分裂而缩短 50-200个碱基对，当其缩短到一定长度时，染色体则无法完成正常复制，细胞 的有丝分裂也会随之停滞，转而进入衰老阶段。端粒酶是一种RNA依赖的DNA 聚合酶，由催化组分端粒酶逆转录酶(hTERT)、端粒酶模板RNA(hTER)以及 端粒酶相关蛋白质组成，其主要作用是延长端粒的长度。在正常的成熟体细胞中， 端粒酶几乎没有活性，但是，在病理状态下，如肿瘤细胞中，其活性异常增高， 使端粒长度得以延长，从而保证了肿瘤细胞的无限分裂增殖。由此可见，端粒酶 活性的异常升高所导致的端粒长度的维持，与肿瘤的发生发展密切相关。 硼替佐米是已经应用于临床的用来治疗多发性骨髓瘤的一种药物，作为26S 蛋白酶体的抑制剂，其已知的主要作用机制是通过抑制NF-K B信号途径，进而 激活caspase 3，同时抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，来诱导肿瘤细胞的凋亡。 虽然硼替佐米在多发性骨髓瘤的治疗中已经取得了良好疗效，但仍有部分耐药病 例出现，因此，我们亟需寻找硼替佐米新型的作用机制以及靶点分子，以使其获 得更加合理的临床应用。 肿瘤抑制因子aridla是染色质重构复合体SWI／SNF的重要组成成分，可结 合于DNA的特定区域，此复合体中的另一成员BRGl或BRM可水解ATP产生能量， 利用这些能量，SWI／SNF重构复合体可使染色质中核小体的组蛋白核心发生移位 万方数据 山东大学博士学位论文甚至脱落，从而转移核小体的位置，改变染色质的构象，使下游基因的转录起始 山东大学博士学位论文 甚至脱落，从而转移核小体的位置，改变染色质的构象，使下游基因的转录起始 部位暴露或隐藏，由此来调控下游基因的转录。目前，众多的基因测序结果显示， 在卵巢癌、胃癌、肾癌、胰腺癌等绝大多数肿瘤中都存在ARIDIA基因的突变或 缺失，这提示aridla可能作为一种抑癌基因来行使作用。但是，具体的抑癌机 制目前研究尚少。 研究目的 1．探讨硼替佐米诱导肿瘤细胞凋亡的过程中，对端粒酶活性和端粒功能的影 响，以发掘其新的作用机制，并对肿瘤细胞产生硼替佐米耐药过程中hTERT所发 挥作用进行研究。 2．探讨胃癌细胞中aridla对hTERT表达的调控及其相关机制，为aridla的抑癌 作用提供证据支持。 研究方法和结果 1．硼替佐米降低端粒酶活性和端粒稳定性诱导肿瘤细胞凋亡 (1)硼替佐米抑制肿瘤细胞端粒酶活性，同时降低其端粒稳定性。 硼替佐米处理白血病细胞HEL和胃癌细胞BGC一823前后，分别用PCR—ELISA 试剂盒检测端粒酶活