第五章 高效液相色谱法j.pptVIP

第三节　高效液相色谱仪 组成 输液系统 进样系统 色谱柱系统 检测系统 数据记录处理系统 一、输液系统 高压输液泵 恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞往复泵 双泵：为了克服流量的脉动。 有串联式和并联式 对HPLC高压泵的要求： 流量精度高且稳定，RSD0.5%，这是最重要的指标 流量范围宽，分析型应在0.1-10ml/min 能在高压下连续工作输出压力应达到20-50Mpa，现多用PSI（2900-7256）, 1Psi=6.89*103Pa=68.9*10-3bar 液缸容积小 密封性能好，耐腐蚀 输液泵操作注意事项： 防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气 二、分离和进样系统 1.进样器 分为手动进样器和自动进样器 进样阀（六通阀） 自动进样装置:通过程序控制依次进样，自身带有溶剂清洗系统，能避免残留的影响，常用10%的甲醇溶液作为洗针溶剂。重现性好，价格昂贵，且可以连续自动进行，而且无需人力值守。 手动进样器图 自动进样器实物图 自动进样器样品盘 2.色谱柱系统（column） 由色谱柱和柱温箱组成 色谱柱由柱管和固定相组成。 色谱柱性能测试包括：在一定条件下（样品、流动相、流速、温度）下的柱压、理论塔板高度H、理论塔板数n、峰对称因子、容量因子和选择性因子的重复性和分离度R 色谱柱实物图1：4.5*250mm型号 色谱柱实物图2 色谱柱实物图3 柱温箱：为选用配件，主要是用于保持色谱柱温度的稳定。适用于对于温度有特殊要求样品的分析。一般情况下，柱温箱可以控制不低于室温的温度范围。 柱温箱实物图 三、检测系统 （一）检测器(detector)的主要性能 要求： 灵敏度（sensitivity）高（检测限低）噪音（noise）低 线性范围（linear range）宽 重复性（repeatability）好 适用范围广（通用型、专属型） （二）紫外检测器(ultraviolet detector) 检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl 特点： 灵敏度较高（10-6～10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。 局限： 只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。 专属型、浓度型检测器 紫外检测器 固定波长检测器 ：254nm 可变波长检测器： 光源：氘灯（和钨灯）， 200～400（800）nm， 单色器，流通池（试样），光电管 光路系统和紫外分光光度计相似 光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector； PDAD)： 一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光 紫外检测器 光电二极管阵列检测器 工作原理：复光通过流通池，再进入单色器，分光后照射在二极管阵列装置上，同时获得各波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱。获得三维光谱－色谱图。 用途：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量,判断峰纯度。 紫外检测器 （三）荧光检测器(fluorescence detector；FD) 检测原理： 化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光； 荧光强度 (F) 与激发光强度 (I0) 及荧光物质浓度 (C) 之间的关系为： F=2.3QKI0εCl Q为量子产率，K为荧光效率，ε为摩尔吸光系数，l为光径长度。 F=KC 荧光检测器(fluorescence detector；FD) 特点： 选择性好，专属型检测器 灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10 g/ml） 激发波长(?ex)和发射波长(?em)的选择 仪器分析 第十八章 高效液相色谱法 化学分析 第一章 绪 论 化学分析 第一章 绪 论 仪器分析 第十八章 高效液相色谱法 化学分析 第二章 化学分析 第一章 绪 论 第五章 高效液相色谱法high performance liquid chromatography；HPLC 目的和任务： 掌握HPLC定性和定量方法 熟悉HPLC色谱条件的选择 了解HPLC的基本类型和基本构造 一. 概述 1、高效液相色谱法（HPLC）：指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离