淋巴细胞分离、E花环.pptVIP

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2019-01-17 发布于浙江
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淋巴细胞分离、E花环.ppt

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淋巴细胞分离、E花环;实验目的;实验原理;实验材料与试剂;实验方法与步骤;4、2500转/分离心20min，离心后，管内可分为四层：上层为血浆、血液稀释液及绝大部分血小板；下层为红细胞及粒细胞；中层为细胞分层液；分层液与血浆交界部位混浊的灰白色层即为淋巴细胞层。 5、另取1只10ml试管，加入6ml D-Hanks液，用毛细吸管轻轻插到白膜层，取吸淋巴细胞层至此试管中，1500转/分离心10min洗涤，共2次。 6、弃上清，用1ml D-Hanks定容细胞，混匀。 7、用瑞氏染液染色，观察所分离细胞的形态和结构，并画图。 ;瑞氏染色;注意事项;3、细胞分层液的密度是影响分离效果的关键之一，最适密度在室温下应为1.077±0.002；应避光4℃下保存，取出后逐渐升至室温后混匀，方可使用；使用中应避免细菌污染。 4、离心时的温度对分离效果亦有影响，温度过低，离心时间需适当延长，淋巴细胞丢失增多；温度过高，增加红细胞凝聚，且影响淋巴细胞活性。离心时最适温度为18-25℃。 ;E花环实验（示教）;实验原理;实验材料;实验方法;4、部分T细胞具有高度亲和力的SRBC受体，当SRBC与淋巴细胞按8:1混合，低速离心后不经低温放置，即能迅速形成E花环，称为Ea花环。;结果与分析;注意事项;结果和讨论