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2019-01-17 发布于浙江
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ELISA技术方法原理.pdf

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酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA ELISA 的发展  50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射性免疫（RIA）分析技术之后，70年代初又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术  1971年此项技术由瑞典学者 Engvall 和Perlmann，荷兰学者Van Weeman和 Schuurs分别报道，将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附测定法（ELISA ELISA基本原理  使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性  使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性  结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关在ELISA方法中有三个必要的试剂：（1 ）固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂” （immunosorbent ）（2 ）酶标记的抗原或抗体，称为“结合物” （conjugate ）（3 ）酶反应的底物用于临床检验的ELISA主要有以下几种类双抗体夹心法测抗原（常用）  夹心法双抗原夹心法测抗体（几乎不用）  间接法测抗体（常用）  竞争法测抗原  竞争法竞争法测抗体  捕获包被法测抗体  亲和素-生物素 ELISA法（放大信号作用）包被特异性抗体（已固定双抗体加入待测样品夹心孵育洗涤法测加酶标特异性抗体抗孵育洗涤原底物显色酶联免疫吸附法基本工作原理是：利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。复合物的形成量与待测抗原的含量成正比。测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质量(OD值) ，即可确定待测抗原含量。酶标仪450nm波长 OD值根据校准品浓度对应的或双波长450/630nm OD值，使用双对数线拟合方式 log （x -log 加终液50ul （Y ）计算结果 =concentr