氟对雄性大鼠生殖内分泌激素的干扰作用及机制的探讨-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2011 届硕士研究生毕业论文 PAGE PAGE 10 前 言 氟是人体所必需的微量元素之一，在体内主要以氟化钙的形式存在，广泛分 布于机体的各组织和器官中，其中以骨骼和牙齿为主，骨骼中长骨的含氟量最高， 而非骨相组织的含氟量并不高。机体吸收氟的部位主要是肠和胃，经尿液排出体 外。人体对氟的含量极为敏感，氟对人体的安全范围比其他微量元素要窄得多， 从满足人体对氟的需要到由于氟过多而导致中毒的量之间相差不多[1]。适量的氟 对机体具有重要的生理作用：可参与钙磷代谢加速骨骼的形成，促进增长，维护 其健康；可预防龋齿，保护牙齿的健康；可通过对某些酶的作用，提高神经的兴 奋性和传导作用。氟如果过量的话则会对机体造成全身性的伤害，损害机体的多 个器官和系统[2]。 由于我国是世界上最大的地方性氟中毒多发地带，氟中毒患者数目巨多，严 重危害了病区人民的身体健康，降低了生活质量，阻碍了经济的发展。因此，氟 中毒一直作为一个热门问题被广大研究者关注。但是，长期以来，对氟中毒的研 究重点放在了氟对牙齿、骨骼等骨相组织的损害上。近几年氟对非骨相组织的损 害引起了人们的重视，尤其是对生殖系统的损害[3-5]。流行病学调查发现高氟区 男性不育症显著高于非高氟区，患者精液的含氟量明显升高、精子数目与质量均 明显降低[6]；动物实验表明氟可对雄性大鼠的生殖器官、生殖细胞结构与功能产 生损害作用；氟中毒也会对雄性大鼠的生殖内分泌激素产生影响[4,7-9]。可见氟中 毒可对雄性生殖系统产生多方面的损害作用，目前对生殖系统的研究重点多放在 对生殖器官的结构和功能的影响方面，对生殖系统损伤机制的研究尚不多见。另 外，研究氟对雄性生殖内分泌激素的干扰作用大多只局限于某个时间点氟对生殖 内分泌的影响，没有动态观察过其影响进程。 本课题组已研究发现，贵州六盘水地区高氟区男性不育症高于非高氟区，氟 中毒大鼠垂体分泌的卵泡刺激素（Follicle-stimulating hormone，FSH）显著性减 少，表明氟中毒会对垂体激素的分泌产生影响。在此基础上本课题选用 SD 大鼠 通过腹腔注射氟化钠建立氟中毒动物模型。采用在不同的时间段处理不同中毒程 度大鼠的方法，来观察随着染氟时间的延长，不同的染氟剂量对雄性大鼠生殖内 分泌激素 FSH、黄体生成素（Luteinizing hormone，LH）、睾酮（Testosterone， T）含量的影响作用。与此同时，测定血清中的超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的含量，探讨自由基和 脂质过氧化物的含量与氟对生殖系统的损害是否存在相关性。通过本课题了解氟 对雄性生殖内分泌激素的影响作用与发生机制，期望为发现早期、灵敏的生物标 志物提供一些线索，为研究地方性氟中毒对生殖系统损害的发生机制提供实验依 据和基础资料。 材料与方法 1.实验动物 一月龄健康的 SD 雄性大鼠 56 只，体重在 80～100g 之间，由贵阳医学院动 物实验室提供。 2.实验材料 氯化钠分析纯 成都金山化学试剂有限公司 氢氧化钠分析纯 成都金山化学试剂有限公司 柠檬酸三钠分析纯 成都金山化学试剂有限公司 磷酸氢二铵分析纯 成都金山化学试剂有限公司 乙酸分析纯 江苏强盛化工有限公司 氟化钠分析纯 成都金山化学试剂有限公司 浓硫酸 成都金山化学试剂有限公司 碘[125I]人促黄体生成激素放射免疫分析药盒 天津九鼎医学生物工程有限 公司 碘[125I]人促卵泡生成激素放射免疫分析药盒 天津九鼎医学生物工程有限 公司 碘[125I]睾酮放射免疫分析药盒 天津九鼎医学生物工程有限公司 超氧化物歧化酶（SOD）测试盒 南京建成科技有限公司 丙二醛（MDA）测定试剂盒 南京建成科技有限公司 3.主要试剂的配置 3.1 1g/L 氟化钠溶液 放适量的氟化钠分析纯于一烧杯中，在 105℃下干 燥 2h，在干燥器中待冷却后，用分析天平准确称取 1g 氟化钠，用去离子水溶解， 定容至 1000ml，混匀备用。 3.2 2g/L 氟化钠溶液 准确称取干燥冷却的氟化钠 2g，用去离子水溶解， 定容至 1000ml，混匀备用。 3.3 4g/L 氟化钠溶液 准确称取干燥冷却的氟化钠 4g，用去离子水溶解， 定容至 1000ml，混匀备用。 3.4 以上试剂均常温保存。 4.主要仪器 数字式离子计（PXJ-1B） 江苏江分店精密分析仪器有限公司 氟离子选择性电极（pF-1） 上海精密科学仪器有限公司 参比电极（232 型） 上海精密科学仪器有限公司 磁力加热搅拌器（CJJ-781） 江苏省金坛县环保仪器厂 放射免疫 γ 计数器 安徽中科中佳科学仪器有限公司 马弗炉 宜兴