复合BMSCs的经等离子体处理PLGA导管修复大鼠坐骨神经缺损的初步分析-外科学专业论文.docxVIP

目录 绪论 1 第一章 骨髓基质干细胞 (BMSCS) 获得、纯化、标记及鉴定 8 1. 引言 8 2. 材料与方法 8 3. 结果 15 4. 讨论 20 5. 小结 21 第二章 等离子体处理对 BMSCS 在 PLGA 材料上黏附和增殖的影响 22 1. 引言 22 2. 材料与方法 22 3. 结果 27 4. 讨论 30 5. 小结 31 第三章 复合 BMSCS 的经等离子体处理 PLGA 导管修复大鼠坐骨神经缺损 33 1. 引言 33 2. 材料与方法 33 3. 结果 39 4. 讨论 47 5. 小结 49 全文总结 52 附录一 综述 53 附录二 等离子体修饰聚乳酸聚羟基乙酸 (PLGA) 神经导管的制作 59 1. 引言 59 2. 材料与方法 60 3. 结果 64 2 2 4. 讨论 67 5. 小结 68 致谢 69 攻读学位期间发表的学术论文 71 1 1 复合BMSCs的经等离子体处理PLGA导管 修复大鼠坐骨神经缺损的初步研究 中文摘要 探寻易于制备和应用的神经移植替代品是外周神经组织工程中的研究重点。主要涉 及两个方面：生物支架材料的制备和种子细胞的选取。经等离子体处理后的材料具有良 好的亲水性能，而骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells, BMSCs）来源方便， 数量较多。因此本课题拟对经等离子体处理并复合了 BMSCs 的神经导管进行研究，以 揭示 BMSCs 能否与经等离子体处理后的材料具有良好的细胞相容性；神经导管上的 BMSCs 能否在体内环境的诱导下分化为许旺细胞（schwann cells, SCs）；在动物实验中 细胞支架复合物能否有效修复外周神经缺损。 本研究旨在探索一种快速获得高纯度 BMSCs 的方法；制备经等离子体处理的聚乳 酸聚羟基乙酸（poly lactic-co-glycolic acid, PLGA）神经导管；检测经等离子体处理的 PLGA 神经导管与 BMSCs 间的细胞相容性；明确经等离子体处理并复合了 BMSCs 的 PLGA 神经导管在修复大鼠坐骨神经缺损中的作用。 获得 BMSCs 的方法已有较多报道，但往往需要多次传代才能达到较高的纯度，此 时细胞状态往往不佳，无法为进一步的研究提供足够的细胞。本研究中通过流式细胞仪 对原代细胞进行初筛并用一种复合胶原酶消化传代的方法，对 BMSCs 进行分离纯化； 检测所获得细胞表面的间充质细胞标记物，并对所获得的细胞向脂肪细胞、软骨细胞、 骨细胞进行三向诱导，以明确所获得的细胞是否具有间充质干细胞的特征。 PLGA 材料作为神经导管支架虽然近年来应用较多，但其理化性质尚未令人满意。 本研究采用等离子体预处理 PLGA 纤维，并采用二维三轴向编织法制作 PLGA 神经导管； 并对导管的机械性能和亲水性以及降解性能进行检测，综合评估所制备的神经导管的理 化性能。 为了评估等离子体处理对 BMSCs 在 PLGA 材料上黏附和增殖的影响，本研究构建 了 BMSCs 和 PLGA 导管的复合体，并采用 MTT 法及电镜、共聚焦显微镜观测细胞在 材料表面的生长情况及细胞行为。 2 2 为了对经等离子体处理并复合了 BMSCs 的 PLGA 神经导管进行体内性能的评估， 本研究用这种复合物修复大鼠坐骨神经缺损，并采用神经电生理检测、免疫组织化学检 测、对电镜超薄切片进行轴突计数等方法，了解这种人工神经导管在生物体内所发挥的 作用及其转归。 结果表明通过流式细胞仪对原代细胞进行初筛并用一种复合胶原酶消化传代的方 法，能快速获得高纯度的 BMSCs；经等离子体预处理，并采用二维三轴向编织法制作 PLGA 神经导管具有良好的机械性能、亲水性及降解性能；BMSCs 在 经等离子体的 PLGA 材料上能良好黏附和增殖；用经等离子体处理并复合了 BMSCs 的 PLGA 神经导 管修复大鼠坐骨神经缺损，能达到和自体神经移植相似的效果。 关键词：BMSCs，等离子体，PLGA，神经导管， PAGE PAGE 3 ABSTRACT The crucial part of peripheral nerve reconstruction in tissue engineering was the fabrication of nerve substitution and the raw material should be easily acquired. Two aspects were involved, one was the preparation of biomaterials, and the other was the cells fo