低剂量X线照射的MSCs对兔椎间盘退变的早期修复作用-骨外科学专业论文.docxVIP

低剂量 X 低剂量 X 线照射的 MSCs 对兔椎间盘退变的早期修复作用 中文摘要 I I PAGE IV PAGE IV 低剂量 X 线照射的 MSCs 对兔椎间盘退变的 早期修复作用 中文摘要 第一部分：低剂量 X 线照射对离体的兔骨髓间充质干细胞增殖和细胞周 期的影响 目的：对兔骨髓间充质干细胞（MSCs）体外培养、扩增及鉴别，低剂量 X 线照 射后经流式细胞仪检测其细胞周期时相的分布及细胞凋亡，CCK-8 检测其增殖活性， 并探讨照射后的 MSCs 增殖活性与 MAPK/ERK 信号通路的关系，为进一步研究提供 实验基础。 方法：于胫骨结节处穿刺抽取 5mL 骨髓，在倒置显微镜下观察其原代及传代后 细胞状态，经流式细胞仪检测细胞表面标记物 CD34、CD44、CD90 的表达，证明是 MSCs。以 CCK-8 法检测照射后细胞的增殖情况，取增殖效应最好的剂量组 MSCs 行 Western-blot，观察 X 线照射对 MSCs 的增殖性与 MAPK/ERK 信号通路的关系。 结果：体外成功培养并扩增兔 MSCs 细胞，细胞高表达 CD44、CD90、不表达 CD34。CCK-8 法检测结果表明 75mGy 低剂量照射后，可明显刺激 MSCs 的增殖，与 假 照 射 组 相 比 有 统 计 学 意 义 (P 0.05 ) 。 Western-blot 显 示 X 线 照 射 后 通 过 影 响 MAPK/ERK 信号通路而刺激 MSCs 的增殖，与假照射组相比具有统计学意义(P0.05)。 结论：密度梯度法分离培养的细胞为 MSCs，X 线照射后影响其细胞周期并通过 调节 MAPK/ERK 信号通路而刺激 MSCs 的增殖活性。 关键词：骨髓间充质干细胞；低剂量 X 线照射；MAPK/ERK 第二部分：低剂量 X 线照射的骨髓间充质干细胞对兔椎间盘退变的 早期修复作用 目的：探讨低剂量 X 线照射的兔骨髓间充质干细胞（MSCs）移植修复兔椎间盘 中文摘要 低剂量 X 线照射的 MSCs 对兔椎间盘退变的早期修复作用 退变的有效性。 方法：新西兰白兔 20 只，随机分为 3 组：1）正常组（n=4），不做任何处理；2） 对照组（n=8），单纯建立兔椎间盘退变模型；3）实验组（n=8），进行退变模型建立 并行低剂量 X 线照射的 MSCs 移植治疗。移植入退变椎间盘后 4 周、6 周，每个时间 点正常组 2 只，对照组 4 只，实验组 4 只，行腰椎侧位 X 线检查，并计算椎间盘高 度指数（DHI）；腰椎 MRI 测量椎间盘 T2 加权像信号强度变化；HE 染色观察椎间盘 退变程度并分级；RT-PCR 检测椎间盘 II 型胶原及聚集蛋白聚糖的基因表达。 结果：DHI 在正常组未见明显下降，实验组及对照组可见轻度狭窄，但实验组 DHI%与对照组相比具有差异（P＜0.05）。MRI 结果显示实验组与对照组椎间盘信号 强度均有不同程度的下降，但实验组信号强度明显强于对照组，且具有统计学意义（P ＜0.05）。组织学检查结果显示，对照组纤维环明显紊乱；实验组纤维环结构层状结 构稍紊乱，可见新鲜的髓核组织，组织学评分提示实验组评分明显优于对照组（P＜ 0.05）。RT-PCR 结果表明实验组 II 型胶原及聚集蛋白聚糖 mRNA 表达水平与对照组 相比具有明显差异（P＜0.05）。 结论：低剂量 X 射线照射的骨髓间充质干细胞移植到椎间盘退变，X 射线，MRI， 病理检测、RT-PCR 进一步证实可以延缓椎间盘退变，可促进椎间盘 II 型胶原及聚集 蛋白聚糖的基因表达，能有效地修复椎间盘退变，具有光明的前景。 关键词：骨髓间充质干细胞；低剂量 X 线照射；细胞移植；椎间盘退变 作 者：张 寅 指导教师：周晓中 低剂量 X 低剂量 X 线照射的 MSCs 对兔椎间盘退变的早期修复作用 英文摘要 PAGE PAGE III PAGE IV PAGE IV In vitro Effects of Low-Dose-X-Irradiation for Mesenchymal stem cells for disc regeneration in a rabbit model Abstract Part 1 Effects of Low-Dose-X-Irradiation for rabbit mesenchymal stem cells: an in vitro study Objective: Rabbit bone marrow stromal cells (MSCs) were cultured in vitro for amplification and identification. Cell cycle d