低剂量节拍化疗对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤血管生成拟态 的影响及可能机制-妇产科学专业论文.docxVIP

中 中 文 摘 要 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 低剂量节拍化疗对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤血管生成拟态的影响 及可能机制 摘 要 目的： 血管生成拟态（Vasculogenic Mimicry，VM）是高度恶性肿瘤中存在 的由肿瘤细胞通过自身变形和细胞外基质重塑所形成的血管样管道。近年 来，越来越多的研究发现恶性肿瘤的生长、转移、侵袭和复发与肿瘤 VM 的 形 成 密 切 相 关 。 膜型 1 基 质 金 属 蛋 白 酶 (Membrane type 1 matrix metalloproteinases，MT1-MMP)作为基质金属蛋白酶类中的一员在恶性肿 瘤的生长、侵袭、转移及复发中具有重要的作用。局部黏着斑激酶(Focal adhesion kinase，FAK)属于蛋白酪氨酸激酶，能够改变细胞与细胞外基质 的粘附性，促进肿瘤细胞的移动、浸润、侵袭及转移。 本实验通过建立人卵巢癌细胞株 HO8910 裸鼠异种移植瘤模型，给予 顺铂（Cisplatin，DDP）最大可耐受剂量化疗(maximum tolerated dose chemotherapy, MTD) 及 低 剂 量 节 拍 化 疗 （ low-dose metronomic chemotherapy，LDM），观察 LDM-DDP 模式下荷人卵巢癌细胞 HO8910 裸鼠移植瘤模型 VM 生长变化情况，并检测 MT1-MMP 及 FAK 的表达水 平，探讨 LDM 对卵巢癌裸鼠移植瘤中 VM 的影响及可能机制。 方法： 1 建立裸鼠移植瘤模型并分组化疗：体外培养 HO8910 细胞，将 1×107 细胞重悬于 0.2ml PBS 中，接种到 6-8 周龄的雌性裸鼠大腿外侧皮下，建 立裸鼠异体移植瘤模型。10 天后随机把 81 只裸鼠分成三组，每组为 27 只： 顺铂最大可耐受剂量（MTD-DDP）组，顺铂 3mg/kg, 1 次/3 日，腹 腔注射，共 6 次；顺铂低剂量节拍化疗（LDM-DDP）组，顺铂 1mg/kg, 1 次/日，腹腔注射，共 18 次；对照组，腹腔注射等量的生理盐水。 2 获取肿瘤样本：给药期间仔细观察裸鼠的一般情况及肿瘤的生长情 况，每隔 1 天测量一次裸鼠的皮下移植瘤体积。根据计算机生成的随机数 表，从化疗开始后每隔 1 天各组随机抽取 3 只裸鼠采用戊巴比妥过量麻醉 处死，在无菌条件下剥离裸鼠皮下移植瘤，将获取的肿瘤样本从中间切开， 一半固定于 4%多聚甲醛中，一半存放于-80℃冰箱中。每次获取 9 个肿瘤 样本，至化疗结束共 9 次，共获取肿瘤样本 81 个。化疗结束后分别计算 MTD-DDP 组及 LDM-DDP 组的抑瘤率。 3 免疫组织化学双重染色：将固定于 4%多聚甲醛中的肿瘤样本进行 石蜡包埋、组织切片，采用 CD31/PAS 双重染色，观察 VM 的表达情况。 划分中央区和外周区，分别在显微镜下连续计数 10 个肿瘤组织高倍视野 （×400）下的 VM，取其均值作为 VM 密度。 4 应用免疫组织化学 SP 法染色和 Western Blot 的方法检测 MT1-MMP 和 FAK 在移植瘤中的表达水平。 结果： 1 裸鼠皮下移植瘤生长情况 自化疗开始，MTD-DDP 组、LDM-DDP 组及对照组三组裸鼠皮下移 植瘤体积一直处于不断增大的状态，化疗结束时各组移植瘤体积均比化疗 开始时增大（PMTD-DDP 组=0.002，PLDM-DDP 组0.001，P 对照组=0.001）。至化 疗 结 束 ， MTD-DDP 组及 LDM-DDP 组 移 植 瘤 的 体 积 均 小 于 对 照 组 （P=0.042，P0.001），而 LDM-DDP 组移植瘤体积又小于 MTD-DDP 组（P=0.009）。MTD-DDP 组抑瘤率为 10.48%，LDM-DDP 组抑瘤率为 31.14%。 2 CD31/PAS 双重染色下的 VM 形态 经过 CD31/PAS 的双重染色，在显微镜低倍镜下看到 VM 和内皮依赖 性血管共存于移植瘤中，内皮依赖性血管多位于移植瘤周边，并可见其与 宿主组织相交，而 VM 多位于移植瘤中央区。换成高倍镜，各组移植瘤 中均可见到樱桃红色的 PAS 阳性管道，部分管道的外层为 CD31 染色呈 阴性的肿瘤细胞，PAS 阳性血管样图案呈直线状、平行状、交叉状、环状、 网状等多种形状，管壁薄厚不一，部分管腔中可见到红细胞。 3 不同化疗模式下 VM 在移植瘤中的生长变化情况 1）不同化疗模式下裸鼠移植瘤中央区 VM 的生长变化 MTD-DDP 组、LDM-DDP 组及对照组三组移植瘤中央区均可观察到 VM，且在化疗第 2 天三组移植瘤中 VM 密度差异不具有统计学意义