蛋白酶体抑制剂MG132对HSC-T6细胞TGF-βSmad信号通路的影响-内科学(感染病学)专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士 学位论 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 英文缩略词及中文对照表 英文缩写 英文说明 中文全称 MG132 Z-Leu-Leu-Leu-CHO 三肽基乙醛 HSC Hepatic stellate cell 肝星状细胞 TGF-β Transforming growth factor-beta 转化生长因子-β ECM Extracellular matrix 细胞外基质 UPP Ubiquitin-proteasome pathway 泛素-蛋白酶体途径 MFB Myofibroblast 肌成纤维细胞 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PBS Phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 MTT 3-(4,5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenylt etrazolium bromide 噻唑蓝 IR Inhibitory rate 抑制率 FQ-RT-PC R Real-time flourescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction 实时荧光定量逆转录聚合 酶链反应 mRNA Messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 CT Cycle threshold 循环阈值 DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦炭酸二乙酯 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 β-actin Beta-actin β-肌动蛋白 TEMED Tetramethyl ethylene diamine 四甲基乙二胺 SDS Sodium dodecylsulphate 十二烷基磺酸钠 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 TBS Tris buffer saline 三羟甲基氨基甲烷缓冲液 ECL Enhance chemiluminescence 增强化学发光 蛋白酶体抑制剂 MG132 对 HSC-T6 细胞 TGF-β/Smad 信号通路的影响 研究生：任章朋 导 师：童巧霞副教授 中文摘要 目的：研究蛋白酶体抑制剂 MG132 对大鼠肝星状细胞系 HSC-T6 细胞中 TGF-β1、Smad3 和 Smad7 表 达 的影响，探讨泛素-蛋白酶体途径在参与转化生 长因子-β/Smad（TGF-β/Smad） 通路中信 号 调 节 的 作用。 方法：体外培养大鼠肝星状细胞系 HSC-T6 细胞，用对数生长期的细胞来进 行实验。分别设对照组（MG132 浓度为 0）和不同浓度的 MG132 处理组，不同 浓度的 MG132 处理细胞 24h 后，采用 MTT 法测定 MG132 对 HSC-T6 细胞的生 长增殖抑制作用，并计算抑制率及 IC50 值；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反 应（FQ-RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测 HSC-T6 细胞中 TGF-β1、Smad3 和 Smad7 的 mRNA 和蛋白的表达水平。 结果：MG132 对 HSC-T6 细胞的生长增殖具有明显抑制作用，在浓度为 0.5、 1、2、2.5、3、5 和 10μmol/L 时，其抑制率分别为 10.02%、16.80%、20.18%、 23.22% 、25.42%、44.53%和 65.18%；与对照组比较，差异均有统计学意义 （P0.05），IC50 值为 6.84μmol/L。浓度为 1、2、3μmol/L MG132 对 HSC-T6 细 胞作用 24 小时后，TGF-β1 和 Smad3 的 mRNA 水平成浓度依赖性减少（P0.05）， 而各组 Smad7 的 mRNA 的表达差异无统计学意义（P0.05）；同时 TGF-β1 和 Smad3 蛋白成浓度依赖性减少，而 Smad7 蛋白成浓度依赖性增加（P0.05）。 结论: MG132 可以下调 HSC-T6 细胞中 TGFβ1 和 Smad3 的 mRNA 和蛋白 表达，同时使 Smad7 蛋白表达上调，但对 Smad7 的 mRNA 表达无明显影响。这 些发现提示 MG132 参与 TGFβ/Smad 通路的信号调节，从而发挥抗肝纤维化的作 用，但其具体机制还须进一步证实。 关键词：肝星状细胞；转化生长因子 β1；Smad3；Smad7；MG132 Effects of proteasome inhibitor MG132 on the transforming growth factor-