二甲双胍对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞胰岛素受体底物-1及其磷酸化表达的影响-妇产科学专业论文.docxVIP

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二甲双胍对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞胰岛素受体底物-1及其磷酸化表达的影响-妇产科学专业论文

宁夏 宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进 行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明 引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式 标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文,同意学校按规定向国家有 关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权宁 夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公 布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 (必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 二甲双胍对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞胰岛素受体底物-1 及其磷酸化表达的影响 摘要 目的 .体外分离培养多囊卵巢综合征(PCOS)和非 PCOS 患者黄素化颗粒细胞并用卵 泡刺激素受体( FSHR)免疫荧光鉴定; .探讨二甲双胍(Met)对 PCOS 黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)及 p-ser307-IRS-1 的信使核糖核酸( mRNA)及蛋白表达水平的影响。 方法 分离纯化体外培养的 PCOS 和非 PCOS 组黄素化颗粒细胞用 FSHR 免疫细胞化学 染色鉴定;添加 Met 处理培养为实验组,添加类胰岛素生长因子-1(IGF-1)为阳性对 照组,15%FBS-M199 培养基中加入与 Met 等量 PBS 培养为阴性对照组;通过 RT-PCR 和 real-time PCR 检测分析 IRS-1mRNA 的表达,细胞免疫荧光化学方法定性和 Western-Blot 定量检测分析 IRS-1 及 p-ser307-IRS-1 蛋白表达。SPSS17.0 统计软件处理 如果 p0.05 表示差异有显著意义。 结果 1.FSHR 蛋白免疫细胞化学染色是鉴定颗粒细胞的特异性标记物,FSHR 阳性染色 定位于细胞胞浆和细胞膜,呈绿色荧光,细胞核呈蓝色荧光,镜下可见 FSHR 的阳性 率大于 95%; 2.RT-PCR 法扩增出 IRS-1 的片段大小为 134bp,real-time PCR 分析结果显示添加 Met 对 PCOS 组黄素化颗粒细胞 IRS-1 mRNA 表达显著下调,与阳性及阴性对照组比 较差异有统计学意义(p0.05); 3.细胞免疫荧光化学检测 IRS-1 及 p-ser307-IRS-1 蛋白阳性表达定位在颗粒细胞细 胞质; 4.Western-blot 检测 Met 作用 24h 后卵巢黄素化颗粒细胞 IRS-1 及 p-ser307-IRS-1 蛋白表达下调,差异有统计学意义(p0.05),灰度值分析结果显示 PCOS 组卵巢黄素化 颗粒细胞 IRS-1 及 p-ser307-IRS-1 蛋白表达高于非 PCOS 组,添加 Met 组作用 24h 后 PCOS 组黄素化颗粒细胞 IRS-1 及 p-ser307-IRS-1 蛋白表达较非 PCOS 组显著性下降 I (p0.05)。 结论 1、FSHR 蛋白免疫荧光化学染色阳性率大于 95%,卵泡液分离黄素化颗粒细胞培养的 纯度达到 95%以上 2、PCOS 患者卵巢颗粒细胞 IRS-1 及其磷酸化表达上升 3、Met 降低 PCOS 患者卵巢颗粒细胞 IRS-1 及其磷酸化的表达 关键词 二甲双胍;胰岛素受体底物-1;黄素化颗粒细胞;多囊卵巢综合征 II The effect of Metformin on Polycystic ovarian syndrome Luteinizing granulosa cells in IRS-1 and phosphorylation Expression Objective: Abstract 1.Isolated and cultured in vitro with polycystic ovary syndrome (polycystic ovarian syndrome PCOS) and non-PCOS patients luteinizing granulosa cells with follicle stimulating hormone receptor (Follicle Stimulating Hormone, FSHR) immunofluorescence; 2.RT-PCR

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