二甲双胍对乳腺癌4T1细胞体内外生长和转移的影响及其机制分析-普通外科专业论文.docx

中文摘要 二甲双胍对乳腺癌 4T1 细胞体内外生长和转移的影响及其机制研究 二甲双胍作用时，4T1 的克隆形成率仅为 4.11%。 4. 二甲双胍抑制乳腺癌细胞周期进行 流式细胞仪检测发现二甲双胍能够抑制乳腺癌细胞从 G0/G1 期进入 S 期，从而阻 止乳腺癌细胞周期的进行（P0.05）；免疫印迹试验（WB）检测发现二甲双胍导致乳 腺癌细胞中 Cyclin D1 表达量的降低，说明二甲双胍抑制乳腺癌细胞增殖可能是通过 下调 Cyclin D1 表达、阻止细胞从 G0/G1 期进入 S 期从而阻止细胞周期进行来实现。 5. 二甲双胍诱导乳腺癌细胞凋亡 通过 Annexin V—FITC/PI 染色流式细胞仪检测、DAPI 染色荧光显微镜检测及免 疫印迹试验（WB）检测发现二甲双胍能够诱导乳腺癌细胞出现凋亡同乳腺癌细胞在 二甲双胍的作用下 Cleaved Caspase-3 表达量升高，说明二甲双胍能够激活细胞凋亡 蛋白 Caspase-3，从而诱导乳腺癌细胞发生凋亡（P0.05）。 6. 二甲双胍抑制乳腺癌细胞的侵袭及迁移 划痕实验发现二甲双胍能够使乳腺癌细胞迁移能力下降；通过 Transwell 结果发 现二甲双胍能够使乳腺癌细胞侵袭能力下降。免疫印迹试验（WB）检测发现二甲双 胍导致乳腺癌细胞中侵袭相关蛋白（MPP-2，MPP-9）表达量下降。 实验结论 1. 二甲双胍可以抑制乳腺癌 4T1 细胞的增殖，将 4T1 细胞阻滞于 G0/G1 期并诱 导细胞凋亡； 2. 二甲双胍可能通过激活 AMPK/mTOR 信号通路抑制乳腺癌 4T1 细胞的增殖， Compound C 可以拮抗二甲双胍对乳腺癌 4T1 细胞的增殖抑制作用； 3. 二甲双胍可以降低乳腺癌 4T1 细胞的迁移能力及侵袭性。 关键词 乳腺癌 二甲双胍 增殖 凋亡 迁移 侵袭 第二部分 二甲双胍对乳腺癌 4T1 细胞体内生长及转移的影响 实验目的 通过建立晚期乳腺癌模型，进一步证实二甲双胍的抗肿瘤作用，并初步探讨其对 晚期乳腺癌远处转移的影响，为二甲双胍的抗肿瘤效应提供新的证据，同时给晚期乳 腺癌的临床治疗提供新的思路和治疗选择。 二甲双胍对乳腺癌 4T1 细胞体内外生长和转移的影响及其机制研究 中文摘要 实验方法 建立晚期乳腺癌 BALB/C 小鼠移植瘤模型，观察二甲双胍治疗对 BALB/C 小鼠 移植瘤生长及肺脏转移的影响。釆用免疫组化（IHC-F）方法检测二甲双胍对移植瘤 中增殖细胞相关抗原（ki-67）及磷酸化 mTOR 表达的影响。采用荧光 TUNEL 检测 移植瘤中细胞凋亡的情况。采用免疫印迹试验（WB）技术检测二甲双胍对移植瘤中 AMPK 蛋白磷酸化及侵袭相关蛋白表达的影响。采用 ELISA 法检测荷瘤小鼠血清胰 岛素和 IGF-1 水平。 实验结果 1. 二甲双胍抑制乳腺癌移植瘤的生长。 通过游标卡尺及精密天平测量发现在 BALB/C 小鼠移植瘤模型中，口服二甲双胍 治疗后能显著缩小 BALB/C 小鼠移植瘤体积（P0.05）。通过免疫组化（IHC-F）检测 发现口服二甲双胍治疗后 BALB/C 小鼠移植瘤组织中的 ki-67 指数显著降低（P0.05）， mTOR 蛋白磷酸化表达量显著下降。通过荧光 TUNEL 染色发现口服二甲双胍治疗后 BALB/C 小鼠移植瘤组织中细胞凋亡数显著增加。 2. 二甲双胍抑制晚期乳腺癌的远处脏器转移。 通过免疫印迹试验（WB）检测发现口服二甲双胍治疗后 BALB/C 小鼠移植瘤组 织中肿瘤侵袭相关蛋白（MPP-2，MPP-9）表达量下降。通过计数 BALB/C 小鼠移植 瘤模型中肺脏转移瘤个数并结合其肺脏 HE 染色病理切片发现口服二甲双胍治疗后， BALB/C 小鼠移植瘤模型中肺脏转移个数显著下降（P0.05）。 实验结论 1. 二甲双胍能够抑制 4T1 小鼠模型异位移植瘤的生长，其主要机制可能包括： 将 4T1 细胞阻滞于 G0/G1 期、诱导细胞凋亡及激活 AMPK/mTOR 信号通路； 2. 二甲双胍能够抑制 4T1 小鼠模型远处脏器转移，其机制可能是抑制了移植瘤 组织中侵袭相关蛋白的表达。 关键词 乳腺癌 二甲双胍 转移 作 者：唐祖雄 指导老师：刘建夏 英文摘要 二甲双胍对乳腺癌 4T1 细胞体内外生长和转移的影响及其机制研究 Growth inhibitory and antimetastatic effect of metformin on mammary cancer 4T1 in vitro and in vivo Abstract Part One Metformin inhibits 4T1 cell growth and invasion in vitro