厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌纤维化中MMPs相关通路的影响-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

1 1 厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌纤维化中 MMPs 相关通路的影响 中文摘要 目的： 探讨 MMPs 通路相关蛋白 MMP-2（matrix metalloproteinases-2）、MMP-14 （matrix metalloproteinases-14）及 TIMP-1（tissue inhibitor of matrix -1）、TIMP-2 （tissue inhibitor of matrix -2）、AGEs-RAGE 蛋白在糖尿病大鼠心肌纤维化过程 中的变化，同时观察厄贝沙坦干预后对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响及 MMPs 通路及 AGEs-RAGE 蛋白的变化。 方法： 1. 糖尿病大鼠模型的制备与分组 健康雄性 SD 大鼠随机分成三组：正常对照组 （CON）、高糖高脂组（HC）和糖尿病实验组。正常对照组（CON）大鼠常规 饮食，其余组大鼠给予高糖高脂饮食，4 周后实验组大鼠一次性腹腔注射链脲佐 菌素（streptozotocin，STZ）30 mg/kg，建立 2 型糖尿病模型。剔除不合格大鼠 后将成功模型随机分为糖尿病组（DM）、厄贝沙坦+糖尿病组（Ir+DM）。Ir+DM 组大鼠给予厄贝沙坦（50 mg/kg/d）连续灌胃至 4w、8w、12w。 2. 观察大鼠的一般情况（包括精神状况、饮食、反应、毛发等）。 3. 每周测量大鼠体重（body weight，BW），以便调节厄贝沙坦用药量。 4.不同时段测定空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）水平，观察模型维持情 况。 5. 分别在 4w、8w、12w 处死各亚组，计算各组大鼠心体比（heart weight/body weight，H/B）和左室重量指数（left ventricular weight index，LVWI）。留取动脉 血测定各组大鼠血浆甘油三酯（triglyceride，TG）及胆固醇（total cholesterol， TC）水平。 6. HE、Masson 染色观察心肌胶原形态。观察糖尿病大鼠心肌纤维化的病理形态 变化。 ELISA 法检测心脏组织 I 型胶原（Collage type I , col I）、III 型胶原（Collage type III ，col III）含量，血浆 TIMP-1、TIMP-2 含量。 PAGE PAGE 2 Western blotting 检测心脏组织 AGE、RAGE、col I、MMP-2、TIMP-2、MMP-14 蛋白表达量。 结果： 1. 大鼠的一般情况 模型组大鼠均出现明显的多食、多饮及体重减轻等糖尿病典型症状，体毛凌 乱且无光泽，反应迟钝并且有大鼠出现白内障及坏疽等症状。治疗组一般状态均 较模型组有所好转。厄贝沙坦给药后可以改善糖尿病的一般状况。 2. 各组大鼠体重（BW）、空腹血糖（FBG）、心体比（H/B）、左室重量指数（LVWI）、 甘油三酯（TC）、总胆固醇（TG）变化情况 与 CON 4w 组相比，HC 4w 组 BW 显著增加（P 0.01），FBG、H/B、LVWI 无明显变化；与 CON 4w 组及 HC 4w 组相比，DM 4w 组大鼠 BW、H/B、LVWI 无明显变化，FBG 显著升高（P 0.01）；与 DM 4w 组相比，Ir+DM 4w 组的 BW、 H/B、LVWI、FBG 无明显变化。 与 CON 8w 组相比，HC 8w 组 BW 显著增加（P 0.01），FBG、H/B、LVWI 无明显变化；与 CON 8w 组及 HC 8w 组相比，DM 8w 组大鼠 BW 显著减轻（P 0.01），FBG、H/B、LVWI 显著增加（P 0.01）；与 DM 8w 组相比，Ir+DM 8w 组的 BW 明显升高，H/B、LVWI 明显降低（P 0.01），FBG 无明显变化。12w 时变化趋势同 8w。 与 CON 组比较，HC 组、DM 组及 Ir+DM 组大鼠血浆 TG、TC 含量均显著 增高（P 0.01）；与 DM 组相比，厄贝沙坦治疗后两者含量变化不明显。 3. 各组大鼠的心脏病理学变化 HE 染色结果显示，DM 组心肌纤维排列不整齐，纤维断裂，细胞间隙增宽。 Ir+DM 组病理情况有所改善。 Masson 染色结果显示，DM 组大鼠心脏间质可见大量的胶原纤维异常增生， 胶原堆积，或交织呈网状，分布不均，纤维化程度较高；Ir+DM 组间质见少量胶 原纤维增生，纤维化程度较 DM 组降低。 ELISA 检测各组大鼠心脏组织 col I、col III、血浆 TIMP-1、TIMP-2 含量变化 4w 时，各组大鼠心肌组织 col I、col III 含量及 col I/col III 比值变化不明显