GB/T 17778-1999预混料中d-生物素的测定　分光光度法.pdf

GB/T 17778-1999 前 言 本标准等效采用日本农牧水产畜牧局发布并实施的饲料添加剂规格 d《一生物素制剂》中的测定标准 第1法。在技术内容上对日本饲料添加剂规格 d《一生物素制剂》的测定方法作了部分改动，即添加了标准 曲线的绘制。同时，按GB/T6379-1986k测试方法的精密度 通过实验室间试验确定标准测试方法的 重复性和再现性》的规定及4个质量控制良好的实验室协同实验的结果，增设了“重复性”。 本标准根据 “质技监标函 1〔999)178号 关于标准GB/T17778-1999复合预混料中d一生物素的 测定第一号修改单的函”进行修改 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准由国家饲料质量监督检验测试中心(武汉)负责起草。 本标准主要起草人:钱方、钱沁、杨先奎。 中华人 民共和 国国家标准 预混料中d一生物素的测定 分 光 光 度 法 Gs/T17778--1999 Methodfordeterminationofd-biotininpremix- Spectrophotometry ， 范围 本标准规定了用P一二甲氨基肉佳醛分光光度法测定饲料添加剂d一生物素和预混料(维生素预混料 和复合预混料)中d一生物素的方法。 本标准适用于饲料添加剂d一生物素、维生素预混料和复合预混料中d一生物素的测定。 2 方法原理 将试样中d一生物素用无水乙醇提取出来，在硫酸乙醇溶液中d一生物素和P一二甲氨基肉桂醛生成橙 红色化合物，在一定范围内颜色深浅与d一生物素含量成正比。 3 试剂和溶液 本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。 3.1无水乙醉(GB/T678-1990). 3.2 硫酸无水乙醇溶液((2+98):量取2mL硫酸和98mL无水乙醇，混匀。 3.3p-=甲氨基肉桂醛无水乙醇溶液(2g/L):称取0.2gh一二甲氨基肉桂醛溶于无水乙醇，用无水乙 醇稀释至100mL,混匀 3.4 d一生物素标准溶液 3.4.1d一生物素标准储备溶液:准确称取0.1000gd一生物素溶解于无水乙醇，定量转人100mL棕色 容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，混匀。此液1.00mL含d一生物素1.00mg, 3.4.2d一生物素标准工作溶液:准确量取d一生物素标准储备溶液1.00mL于100mL容量瓶中，加无 水乙醇稀释至刻度，混匀。此液1.00mL含d一生物素10.00Wg, 4 仪器、设备 4.1 分光光度计:1.0cm比色皿，可在530nm处测定吸光度。 4.2 磨口平底烧瓶:200mL. 5 试样制备 取具有代表性样品至少2kg，用四分法缩分至250g,粉碎过。.42mm孔筛，混匀，装入样品瓶内密 闭，保存备用。 国家质11技术监督局1999一06一14批准 2000一02一01实施 cs/T 17778-1999 6 测定步骤 6.1 提取 6.1.1 预混料中a一生物素的提取 称取试样约5g(精确至0.0001g)，置于磨口平底烧瓶中，加入30mL无水乙醇，置水浴中煮沸回 流45min,冷却至室温后，转移到50mL容量瓶中，用无水乙醉稀释至刻度。过滤，弃去开始的20mL, 余下作为试样提取液。 6.1.2 饲料添加剂d一生物素的提取 称取试样约1g(精确至0.0001g)，置于磨口平底烧瓶中，加人30mL无水乙醇，置水浴中煮沸回 流45min，冷却至室温后，转移到100mL容量瓶中，用无水乙醉稀释至刻度。过滤，弃去开始的20ML, 余下作为试样提取液。 6.2 测定 6.2门 试样的测定 精确吸取6.1.1试样提取液5.00mL或6.1.2试样提取液2.00mL于25mL容量瓶中.加入硫酸 无水乙醇溶液(3.2)1.0mL和P一二甲氨基肉桂醛无水乙醉溶液((3.3)2mL，摇匀，室温下放置1h，用无 水乙醇(3.1)稀释至刻度，摇匀;另取无水乙醉代替样液，与试样同时同样处理，作参比液。用1.0cm比 色皿在530nm处，用分光光度计测定吸光度，在标准曲线上查得试样