番茄癒伤组织诱导、细胞培养及体胚分化之研究.docVIP

番茄癒傷組織誘導、細胞培養及體胚分化之研究Studies on Callus Induction, Cell Culture and Somatic Embryogenesis of Lycopersicon esculentum var. Santa研究生：徐振權Chen-Chuan Shyu指導教授：鄭秋雄Chiu-Chsiung Cheng【摘要】本研究之目的為研發番茄癒傷組織誘導培養技術、懸浮細胞培養技術及體胚分化培養技術，建立經濟、快速、安全之體胚分化系統，以做為無病毒種苗大量繁殖及抗性品種篩選、育種工作之參考依據。以盆栽45-50天株齡聖女番茄植株之葉肉組織及莖部組織做為供試材料，探討培養基組成、植物生長調節劑組成、氨基酸組成、維他命組成、蔗糖含量、光照度及培植體對誘導番茄癒傷組織之影響。結果以莖組織之上、中段組織及葉塊組織做為培植體，培養於含10~12 mg/l NAA、六種維他命（0.5mg/l thiamina-HCl, 0.5 mg/l pyridoxine-HCl, 0.5 mg/l nicotinic acid, 0.1mg/l biotin, 0.4 mg/l folic acid and 0.5 mg/l ascorbic acid）、兩種氨基酸（1 mg/l glutamic acid及1 mg/l aspartic acid）及3% 蔗糖 之CS-1 固體培養基中，於3200~4200 lux之光照度等培養條件下誘導培養10天不僅可獲得高產量、質地鬆軟、褐變率低之癒傷組織，且可縮短誘導培養時間。另，為獲得增殖能高、活性佳及分化能強之番茄培養細胞，探討培養基組成、植物生長調節劑組成、碳素源及含量、pH值、光照度、培養細胞來源及培養細胞密度對培養細胞增殖之影響，結果以莖部上、中段組織之培養細胞以2.5×105 cells/ml為細胞密度培養於含10 mg/l NAA、3% 蔗糖、0.03%葡萄糖、0.03%果糖之CSW-1 液體培養基（pH 6.0~6.5）中，於無光下振盪培養（100 rpm/min.）7天可達最高之增殖倍數約1.18倍，且可降低培養細胞之破裂。以此培養條件進行番茄培養細胞生長曲線之觀察，其各時期分別為0~1天為誘導期（lag phase），1~4天為對數增殖期（exponential phase），4~5天為直線生長期（linear phase），5~9天為衰退期（progressive deceleration），9~10天為穩定期（stationary phase），故番茄懸浮細胞增殖培養之繼代培養應以4~5天為單位繼代培養時間為宜。又，為建立番茄體胚分化培養技術，探討植物生長調節劑組成、蔗糖含量、培養細胞來源、細胞團誘導培養天數及光照度對單細胞分化體胚之影響，結果以莖部中段組織之培養細胞培養於含10 mg/l NAA之CSW-1液體培養基中，於無光下培養7天分化出細胞團，再將細胞團移入含1 mg/l NAA 及 5~7 mg/l BA之CSW-1培養基於無光下行繼代培養14天（每週更換新鮮培養基）之體胚分化率最佳，約14.9%。關鍵字：番茄、癒傷組織、細胞培養、體胚分化 【Abstract】The purposes of this study are to develop the techniques of callus induction, suspension cell culture, embryogenesis of tomato, to establish a economical, effective and safety system for somatic embryogenesis of tomato and to serve as the references for micropropagation of virus-free seedling and the selection and breeding of disease-resistant strains. Using the stem tissue and leaf disc of 45~50-day-old of Lycopersicon esculentum var. Santa., as the materials to evaluate the effects of the compositions of medium, plant growth regulator, amino acid and vitamin, sucrose concentration, light intensity and explants on callus induction of tomato. T