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叶绿体的分离与荧光观察 ;目的要求 基本原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告;实验目的;实验原理; 荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时能在短时间内放射出比照射波长更长的光（如可见光），称为荧光。有些生物体内物质受激发光照射后可直接发出荧光，称自发荧光，如叶绿素的火红色; 材料本身不发荧光，但吸收荧光染料后同样也能发荧光，称次生荧光，如叶绿体吸收吖啶橙后发的橘红色荧光。 ;实验方法;3．将上清液在3000r/min下离心5min，弃上清，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核） 4．将沉淀用0.35mol/lNaCL溶液悬浮;5．取叶绿体悬液一滴滴于载片上，加盖片后可在光学显微镜和荧光显微镜下观察 ①在普通光镜下观察 ②在荧光显微镜下观察 ③滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料，荧光显微镜下观察 ;实验结果;实验报告;细胞的凝集反应;目的要求 基本原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告;实验目的;实验原理; 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数除外）并能与糖专一结合的蛋白质，它能具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用，凝集素使细胞凝集是由于他与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 ;实验用品;4、2%的红细胞 以无菌方法抽取甲鱼血（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次离心2000rpm，5min；之后按红细胞压积（红细胞在血液中所占的容积比值称为红细胞压积）用生理盐水稀释为2%的红细胞悬液。 ;实验方法; 用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞悬液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍镜下观察血球凝集现象。以PBS液加2%红细胞悬液作对照实验。 ;实验结果;实验报告;细胞膜的渗透性;目的要求 基本原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告;实验目的;实验原理;红细胞膨胀 到一定程度时，细胞膜破裂，即红细胞发生溶血.由于溶质透人速度不同，溶血时间也不同。 ;实验用品;实验方法;2 、鸡血红细胞的渗透性：取试管10支，分别加入上述10种溶液各10 mL，再 加入1mL稀释的鸡血??记下时间，轻轻摇动使混匀，注意是否发生溶血；若发生溶血，记录溶血过程所需的时间（自加入稀释鸡血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。 ;实验结果;实验报告;细胞融合;目的要求 基本原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告;实验目的;实验原理; 表面张力作用， 从而使细胞发生融合，进而细胞质沟通，形成一个双核或多核细胞;实验用品;0.85％生理盐水：0.85g氯化钠溶于 100mL重蒸水中。 ALsver液： 葡萄糖 2.05g , 枸橼酸钠 0.8g , NaCl 0.42 加蒸馏水至100ml GKN液： NaCl 8g ，KCl 0.4g , Na2HPO4·2H2O 1.77g ， NaH2PO4·H2O 0.69g , 葡萄糖 2g ,苯酚红 0.01g 溶于1000ml蒸馏水中 ;50％PEG混合液： 称取少许PEG(Mw 6000)放人刻度离心管内，在沸水浴中加热， 使其溶化，待冷却至50℃时，加入预热至50℃ 的等体积的GKN液，混匀。注意使用前配制。;实验方法;4.取上述细胞悬液1ml与刻度试管中，用血细胞计数板计数，用GKN液将其调整为5×106个/ml 5.取上述细胞悬液1ml于另一刻度试管中，放入37℃水浴中，浴热20min，PEG液也浴热20min ;6、20min后，将0.5ml 50%PEG液逐滴沿管壁加入到1ml细胞悬液中，边加入边摇匀，然后再放入37℃水浴中保温20min。 7、20min后，取少量于载玻片上，置显微镜下观察。 ;实验结果;实验报告;线粒体的分离与观察;目的要求 基本原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告;实验目的;实验原理;悬浮介质：通常用缓冲的蔗糖溶液，它比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能够保持细胞器的结构和酶的活性。 詹纳斯活染：詹纳斯绿B是对线粒体专一的、毒性很小的、活性染料，由于其碱性，解离后; 带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体的细胞色素氧化酶使该染料保持在氧化状态呈现蓝绿色从而使线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。 ;实验用品;实验方法;3、取上清1ml于EP管中，13300r/min离心10min，弃上清。 4、将沉淀用1ml缓冲液悬浮，然后13300r/min离心10min，弃上清，沉淀即为线粒体。 ;5、取沉淀涂片，不待干即滴加詹纳斯绿B染20min，盖上盖玻片，镜检。 6、注意 整个操作过程应注意使样品保持4摄氏度左右，避免酶