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即用型SABC 免疫组化染色试剂盒使用说明书 产品编号： SA1020—小鼠/兔IgG(适于一抗为小鼠单克隆和兔多克隆抗体) SA1021—小鼠IgG(适于一抗为小鼠IgG 类单克隆抗体) SA1022—兔IgG(适于一抗为兔多克隆抗体) SA1026—小鼠IgM(适于一抗为小鼠IgM 类单克隆抗体) 试剂的保存：4℃可保存一年，应避免冷冻。 工作原理 SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素的等电点为IP10.0-10.5,在一般缓冲 液中带阳电荷，对组织和细胞的阴离子集团有较强的亲和力，因而基于亲和素的免疫组化方 法有时会有严重的背景问题。而链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的 非特异吸附很低，因而基于链霉亲和素的免疫组化方法背景往往很低。SABC 即StreptAvidin—Biotin Complex,。根据研究，SABC 大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC 具有很高的敏感性。SABC 兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。 试剂盒中内容 1.正常山羊血清封闭液：12ml。为二抗同种动物血清，用于组织切片的封闭。 2.二抗：12ml。亲和纯化抗体，标记长臂生物素。山羊抗小鼠IgG(或IgM)或兔IgG。 3.SABC：12ml。链酶亲和素—过氧化物酶复合物。 4. 试剂盒附送试剂：复合消化液—6ml，消化石蜡切片以暴露被遮蔽的抗原。 抗原修复液I—6ml，接在热修复抗原之后，进一步增强某些指标染色。 用户自备试剂： 1． 粘片剂APES 或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。 2． 0.02M PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml 蒸馏水中加氯化钠9g, Na2HPO4·12H2O 7g, NaH2PO4·2H2O 0.5g)。 3． 0.01M 枸橼酸盐缓冲液：1000ml 蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g, 枸 橼酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。 4． DAB显色试剂盒（博士德公司有售）。 免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比 较各程序染色结果。 A程序：石蜡切片热修复抗原程序。适于核抗原，易被固定破坏的抗原。 B程序：石蜡切片酶消化程序。适于被固定遮避的抗原。 C程序：石蜡切片酶不消化/修复程序。适于稳定的抗原。 D程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。 A.石蜡切片微波修复抗原染色程序: 1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以 使切片紧密粘附。 2. 切片常规脱蜡至水。 3. 30%H2O2 1 份+蒸馏水10 份混合,室温5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3 次。 4． 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾 后断电，间隔5-10 分钟后，反复1-2 次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2 次。 5. 抗原修复液I：对于大部分指标，可以直接进入第6 步；对于难以显示的抗原，可用抗 原修复液I 进一步暴露抗原——滴加在切片上室温10 分钟后，PBS（pH7.2-7.6）洗涤 2-3 次。 6. 滴加正常山羊血清封闭液,室温20 分钟。甩去多余液体, 不洗。 7. 滴加适当稀释的一抗（小鼠或兔IgG），37 ℃ 1 小时左右或20℃时2 小时左右。也可 4℃过夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2 分钟×3 次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色 强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育 时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。） 8. 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG(或兔、人IgG),20-37℃ 20 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2 分钟×3 次。 9. 滴加试剂SABC,20-37℃ 20 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5 分钟×4 次。 10. DAB 显色:使用DAB 显色试剂盒(AR1022)。取1ml 蒸馏水,加试剂盒中A,B,C 试剂各1 滴, 混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30 分钟之间。也可自配显 色剂显色。蒸馏水洗涤。 11. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。 B. 石蜡切片酶消化程序: 以下面的步骤代替A 程序中的第4-5 步:滴加复合消化液5-10 分钟。蒸馏水洗3 次。 C. 石蜡切片酶不消化/修复程序: 对于不需要