正相高效液相色谱法法测定恩替卡韦原料对映异构体.docVIP

正相高效液相色谱法法测定恩替卡韦原料对映异构体 　　摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定恩替卡韦对映异构体的方法。方法：色谱柱为CHIRALPAK AD-H （250mm×4.6mm，5μm），以正己烷-异丙醇-无水乙醇-三氟乙酸（70：10：20：0.5）为流动相，流速为0.8ml﹒min-1，检测波长为254nm。结果：在本方法中，恩替卡韦的线性关系良好，r为0.9999；专属性强，恩替卡韦与对映异构体之间的分离度良好；精密度和稳定性良好，RSD均小于2%。结论：该方法准确、简便、快速，可用于恩替卡韦的对映异构体测定。 　　关键词：恩替卡韦 对映异构体测定 高效液相色谱法 　　Enantiomers of Entecavir by HPLC 　　Zhao Hai-qiao Wu Shuang-jun Fu Jian Su Gui-yong 　　（Shandong Fangming Pharmaceutical Group CO.，LTD.，Dongming 274500 ，China） 　　Abstract：Objective To establish a method for the enantiomers of Entecavirby HPLC.Methods The determination was carried out on CHIRALPAK AD-H，with Hexane - Isopropanol -ethanol - trifluoroacetic acid （70：10：：30： 0.5） as the mobile phase at the flow rate of 0.8ml？min-1 .The detection wavelength was 254nm. Results The method showed good linearity with a correlation coefficient （r） of 0.9999； the precision and stability were satisfactory with all RSDs below 2%. Conclusion This method is an accurate，fast and simple method for the enantiomers of Entecavirtablets. 　　Key word： entecavir Enantiomers HPLC 　　恩替卡韦（Entecavir）为必威体育精装版抗乙肝病毒的一线药物，恩替卡韦是环戊酰鸟苷类似物。II/III期临床研究表明，成人每日口服0.5mg能有效抑制HBV-DNA复制，疗效优于拉米夫定；III期临床研究表明，对发生YMDD变异者将剂量提高至每日1mg能有效抑制HBVDNA复制。对初治患者治疗1年时的耐药发生率为0，但对已发生YMDD变异患者治疗1年时的耐药发生率为5.8%。我国SFDA也已批准用于治疗慢性乙型肝炎患者。恩替卡韦对映异构体测定目前还未有报道，本文建立的方法，方法简便，结果可靠。 　　一、仪器与试药 　　1.仪器 日本岛津 SPD-20A高效液相色谱仪。 　　2.试药 恩替卡韦对照品（山东方明药业集团股份有限公司，1301001）；正己烷、三氟乙酸、无水乙醇为色谱纯；对映异构体对照品（山东方明药业集团股份有限公司，1205001）；恩替卡韦（山东方明药业集团股份有限公司；批号：1310001、1310002、1310003） 　　二、方法与结果 　　1.色谱条件 　　色谱柱为CHIRALPAK AD-H （250mm×4.6mm，5μm），以正己烷-无水乙醇-三氟乙酸（70：30：0.5）为流动相，流速为0.8ml﹒min-1，检测波长为254nm，柱温为30℃，进样量为20μl。 　　2.供试品溶液的制备 　　取恩替卡韦对照品约20mg，精密称定，置20ml容量瓶中，加稀释剂（正己烷：无水乙醇=1：1）溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。 　　3.对照溶液的制备 　　精密量取恩替卡韦供试品溶液0.1ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 　　4.专属性试验 　　为考察空白溶剂对本品异构体检测的影响，进行专属性试验。取恩替卡韦对映异构体及恩替卡韦对照品各约5mg，分别置两个100ml量瓶中，加稀释剂适量超声使溶解，放冷至室温，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取分离度试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果表明，空白溶剂不干扰本品异构体的检测。恩替卡韦与其对映异构体能有效分离。 　　5.线性关系考察 　　通过试验考察本品对照溶液浓度与峰面积在一定范围内