禽病毒性疾实验室诊断.docVIP

第八章 家禽常见病毒病的实验室诊断 第一节 新城疫 新城疫（ND）是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱和腺胃乳头出血为特征。 一、病原学特征 鸡新城疫的病原体是副粘病毒科、腮腺炎病毒属的新城疫病毒。成熟的病毒粒子一般为圆形，直径为100300nm，病毒有囊膜，在囊膜外有大约8nm的纤突。病毒的基因为不分节段的单股负链RNA病毒。 该病毒能在鸡胚内良好生长，接种911日龄鸡胚绒毛尿囊膜上或尿囊腔中，强毒株能在36~72小时使鸡胚死亡，弱毒株在1周左右死亡，死亡的鸡胚全身充血、出血，头部和足趾部更明显，胚液内含有大量病毒。鸡新城疫病毒还能在鸡胚成纤维细胞上增殖，并能产生明显的细胞病变，可用以分离、增殖和鉴定病毒。 该病毒能凝集鸡、人和豚鼠等多种动物的红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异的免疫血清所抑制，其凝集作用具有特异性。因此临床上可用凝集试验和凝集抑制试验鉴定病毒和进行免疫检测。 鸡新城疫病毒对各种理化因素抵抗力较强，对热抵抗力弱，太阳直晒30min死亡，加热60℃经30min、70℃2min、100℃1min即被杀死，在37℃可存活7~9天，30~32℃可存活21~30天，在腐败的尸体、粪便及粘液中可存活14天，在冷冻鸡体内可存活三年之久，在低温条件下可长时间保存。本病毒对常用消毒药敏感，1%来苏尔、0.3%过氧乙酸、2%氢氧化钠、5%漂白粉、70%酒精20min即可将病毒。 二、实验室诊断 （一） 病料采集与处理 病禽出现症状后，大多数器官和分泌物中含有病毒，作为分离病毒的材料要求新鲜，最好选发病初期的病鸡脾、肺和脑；发病中后期取脑、骨髓作为分离病毒的材料，经充分研磨用灭菌生理盐水或PBS液作1:5~1:10稀释，每毫升上清液加入1000青霉素链霉素。置4℃冰箱中接种材料。 （二）病毒的分离 选无母源抗体的911日龄的鸡胚，每胚经尿囊腔接种0.1ml接种材料，然后放入37℃恒温箱中，每天照蛋一次（孵化72后每天照蛋3次），24内死亡胚弃去不用。以后死亡胚放入4℃冰箱保存，培养到96120h，终止培养，放入4℃冰箱中，冷冻后吸取尿囊液。（三）病原鉴定 1.血凝与血凝抑制试验血凝与血凝抑制试验采取的尿囊液进行红细胞凝集试验，若能凝集鸡的红细胞，该病毒有可能是新城疫病毒，但仅凭红细胞凝集还不能确定为鸡新城疫病毒，因禽流感病毒、禽腺病毒等都能凝集禽类红细胞。因此，要想确定分离的病毒是新城疫病毒，必须与已知抗新城疫病毒的血清进行血凝抑制试验。如果所分离的病毒能被这种特异性抗体所抑制，才能证明该病毒是新城疫病毒。 凝抑制除可作为病毒鉴定外，还可新城疫病鸡群感染新城疫1015天后，血清抗体水平明显提高，利用血凝抑制测定，比较鸡群发病前后血凝抑制抗体效价的变化，就可认定该鸡群是否有鸡新城疫病毒感染。如发病前抗体效价（1:3264），发病后检测（1015天）抗体效价达1:（5121064）即可判断鸡群感染新城疫病毒。.血清中和试验 在鸡新城疫免疫血清中加入一定量的待检病毒，两者混合后，注射9~10日龄鸡胚（非免疫鸡所产蛋），或鸡胚成纤维细胞或易感鸡，并设不加血清的病毒对照。结果注射血清和病毒混合材料的鸡胚或鸡不死亡，鸡胚成纤维细胞无病变；而对照组鸡胚或鸡死亡，鸡胚成纤维细胞出现病变，则可肯定待检病毒为鸡鸡新城疫病毒。 3荧光抗体技术、℃染色30min，取出立即用pH8.0PBS反复洗3次，然后滴加0.1%伊文思蓝，作用2~3s后，再用PBS冲洗；然后用9：1缓冲甘油封固，镜检。在荧光显微镜下见荧光者为鸡新城疫病毒所在部位。 4. 其他血清学试验 琼脂扩散试验以及酶联免疫吸附试验、单克隆抗体法等，已在国内有条件的单位应用。 . 动物回归试验 选用健康未感染新城疫1011日龄雏鸡，用上述分离毒1:10稀释，每只雏鸡肌肉0.1~0.2毫升禽流感一、病原学特征 禽流感的病原是流感病，属于RNA病毒的正粘病毒科病毒一般为球形，直径为80～120，但也常有同样直径的丝状形态，长短不一。病毒表面有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）/和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性的不同，目前可分为1H亚型和N亚型。 病毒，能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，凝集红细胞的能力可被特异的免疫血清所抑制，临床上可以用血凝和血凝抑制试验鉴定病毒和进行免疫检测。禽流感病毒对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感。常用消毒剂容易将其灭活，如氧化剂、稀酸、十二烷基硫酸钠、卤素化合物（如漂白粉和碘剂）等都能迅速破坏其传染性。该病毒对热比较敏感，65°C加热30min或煮沸（100°C）2min以上可灭活。病毒在粪便中可存活1周，在水中可存活1个月，在pH4.1的条件下也具有存活能力。病毒对低温抵抗力较强，在有甘油保护