禽曲霉菌病规禽场实验室资料.docVIP

第六章 常用血清学检验技术 第一节 凝集试验 凝集试验是指颗粒性抗原（完整的细菌、红细胞等）与相应抗体结合后，在有电解质存在的适宜条件下产生凝集现象的一种血清学试验。参与反应的抗原称为凝集原，凝集原是细菌和红细胞；参与反应的抗体称为凝集素，凝集素是IgG和IgM。 凝集试验有直接凝集试验和间接凝集试验两种类型，通常的凝集试验是指直接凝集试验。 一、直接凝集试验 玻片凝集试验 玻片凝集试验为定性试验可用于分离细菌的快速鉴定。一般用已知抗体作为诊断血清与受检颗粒抗原各加一滴在玻片上，混匀，分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现颗粒凝集的为阳性反应。此法简便、快速，适用于从病料标本中分离得到的菌种的诊断或分型，主要用于沙门氏菌、大肠杆菌属的鉴定。具体操作方法如下： （1）取干燥洁净玻片2块．用记号笔编号(在玻片左上角分别编号为l、2)。 （2）用尖嘴滴管吸取生理盐水，在第1号玻片中央放一滴。另取1支尖嘴滴管吸取已适当稀释的诊断血清，在第2号玻片的中央放一滴。 （3）再取1支尖嘴吸管吸取待测菌株悬液，分别在生理盐水和已知抗血清旁边各加一滴。 （4）用手轻轻摇动玻片，使未知菌液与生理盐水已知抗血清混合，放置数分钟后，肉眼或低倍镜观察结果。 （5）结果判断，对照生理盐水加菌液呈均匀混浊状，如某抗血清加菌液也呈均匀混浊状，则为阴性，说明该未知菌不属此抗血清的相应菌株；如某抗血清加菌液出现颗粒状或絮状凝集，凝集块周围变清，则为阳性，说明该未知菌是与此抗血清相应的菌株或部分组分相同的菌株。 全血、血清玻板凝集试验 本试验主要用于鸡白痢、鸡伤寒、禽支原体病、传染性鼻炎的大群检疫和临床快速诊断等。:1600（＋＋）。 2．操作方法：先将抗原充分振荡均匀，用滴管吸取抗原垂直滴一滴（约0.05毫升）于玻板上。随即用针头刺破被检鸡的翅静脉或鸡冠出血，以灭菌铂耳（环径约4～5毫米）取血满环（约0.02毫升）放于抗原上，用铂耳搅拌均匀。并摊开至直径2厘米为度。静置待判定。每次试验时，均需有阳性血清对照。 3．结果判定 （1）抗原和血液混合后，在2分钟内出现明显的颗粒凝集或块状凝集为阳性（＋）反应。 （2）在2分钟内不出现凝集，或仅呈现均匀一致的细微颗粒。或在边缘处由于临干前形成有细絮状物等均判为阴性（－）。 （3）上述反应以外，不易判为阳性或阴性的，判为可疑。 （三） 试管凝集试验 试管凝集试验是一种定量试验，不仅用于未知抗原如细菌或抗体的鉴定，还可测定抗体的效价。在微生物学检验中常用已知细菌作为抗原液与一系列递度倍比稀释的待检血清混合，保温后观察每管内抗原凝集程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价，通常以产生明显凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体的效价，亦称为滴度。在试验中，由于电解质浓度和pH不适当等原因，可引起抗原的非特异性凝集，出现假阳性反应，因此必须设不加抗体的稀释液作对照组。具体操作方法如下： 取10支干净小试管放在试管架上，自左向右依次编号为1~10。 于第1管加入0.9mL生理盐水，其他各管分别加入0.5mL生理盐水。 （3）抗体稀释用吸管取0.1mL待检血清放入第1管，混匀后，吸出0.5mL，移入第2管依次类推，按二倍稀释法将待检血清稀释到第8管注意每一稀释度需换1支无菌吸管，并从第8管吸出0.5mL弃去。如此待检血清的稀释度分别为1：10、1：20、1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280。在第9支试管中加入0.5mL经适当稀释的诊断血清，作阳性对照。在第10支试管中加入0.5mL生理盐水作为阴性对照管。 （4）加抗原分别向上述10支试管内加入0.5mL已知菌液。轻轻摇动使其混匀，此时各管血清倍。待检血清的稀释度分别为1：20、1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280（5）置37℃水浴锅中作用18~24h。 （6）结果观察判断，标准如下： ++++ 100％凝集完全凝集，上层变清+++ 约75％凝集绝大部分凝集、上层略浑++ 约50％凝集部分凝集，上层较浑+ 约25％凝集很少部分凝集、上层浑浊- 无凝集液体浑浊 阳性对照管（第9管）出现%凝集，阴性对照第10管为“-”反应时，以其前面某管中出现“++”反应的最大稀释倍数为血清的抗体效价。 微量凝集试验 微量凝集试验是一种简便的定量试验，特别适用于禽传染病的大规模流行病学调查。 试验时选用U形或V形96孔微量反应板，用微量移液器将待检血清在反应板上做系列稀释，随后滴加抗原，震荡混匀后静置4~5h判定结果，以出现++”的血清最大稀释倍数为微量凝集试验滴度。 二、间接凝集试验 将可溶性抗原（或抗体）吸附于一种与免疫无关的、适当大小的载体微粒表面，再与相应抗体或可溶性抗原在适宜条件下相互作用