GenerationofNaive-LikePorcine-Induced翻译.docVIP

原始态像猪诱导产生的多能干细胞能够促进胚胎和胎儿发育多能干细胞（PSCs），有2种类型： naive and primed 原始态多能性(naive pluripotency)和始发态多能性(primed pluripotency)PSC是原始态，人的是始发态，先前有报道说猪PSC出现在始发态，本研究中，假定原始态猪PS细胞猪胚胎成纤维细胞逆转录病毒载体表达山中的4个基因。 (pLIF)和forskolin.存在下。细胞表达多能性标记并且形成胚胎体，胚胎体从所有3个胚层生成细胞型，细胞的原始态被由pLIF依赖要求，活跃的2个X染色体（雌性），缺少MHC 类 I表达，特征基因表达配置。猪iPS细胞的体外胚胎发育（11/24，45.8％），评估荧光标记物。他们也推动了在子宫内胎儿的发育（11/71，23日的15.5％，1/13，7.7％在第65天）。这是第一个宏观示范来自原始态像猪的PSC荧光嵌合体，虽然成年嵌合体。简介. Ontogenetically, 原始态PSC对应着床前囊胚的内细胞团（ICM）细胞，(XaXa)，和没有或者非常低水平的MHC类I抗原表达。在这种背景下，鼠的PSCs，两者 (ESCs)和 鼠的(iPSCs)都是在原始状态。 相反，始发态的PSCs有非常有限的能力对于生成嵌合体后代。他们来自于平板克隆。他们有一个增殖反应对于基本成纤维增长因子(bFGF)和激活代替LIF，并且有一个灭活的X染色体(XaXi)。他们是阳性的对于MHC类I抗的表达。人PSCs, both ESCs 和iPSCs，有共同的特征伴随着鼠epistem上皮干细胞来自外胚层的着床前，并且他们出现在始发态。先前的报到PSCs either ESCs or iPSCs，来自于其他动物的如猴子，猪，兔子也出现在始发态，因为这些动物PSCs通常有非常有限的能力对于产生嵌合体的后代。然而，已经有报道说非原始态或者甚至非多潜能细胞也能有助于胚胎和成体的发育在猪中。 在鼠和非许可的鼠中，原始态的PSCs能被产生通过LIF和2信号转导抑制剂（2i，丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶抑制剂PD0325901和糖原合成酶激酶的3b抑制剂CHIR99021PSCs (ESCs and iPSCs)在始发态能被转换为原始态通过和2i,LIF,和腺苷酸环化酶激活剂Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc, and Nanog基因的持续表达也能诱导人PSCs类似原始态。因为是不可能的去检测人PSCs发育成嵌合体的能力，在其他动物的模型中检测是被需要的。这里，假定的原始态的猪iPSCs,的分离已经被展示出来，假定的原始态的猪iPSCs和鼠原始态的PSCs,有非常相似的特征。此外，他们有能力提供胚胎发育。 材料和方法 猪 humanized Kusabira-orange（huKO）转基因猪（Porco Rosso）饲养在明治大学（神奈川县，日本）[28]。近交系Clawn小型猪（Porco Clawn）购自日本农场（日本鹿儿岛市）。杂交大型白/长白猪杜洛克）青春期母猪作为异基因胚胎的代孕妈妈猪。所有的研究都涉及猪和老鼠批准了动物护理和使用委员会Jichi医疗大学和明治大学。从猪胚胎成纤维细胞（PEFs）分离总RNA，并通过使用SuperScript III逆转录酶（Invitrogen，Rockville，MD）和oligo（dT）引物（Takara Bio, Shiga, Japan），以产生cDNA。聚合酶链反应（PCR），然后，进行扩增猪LIF（PLIF）cDNA使用的Ex Taq酶试剂盒（Takara Bio公司）和特异性引物；（5￠-GCC CTCTGG AGT TCA GCC CAT AAT G-3￠) and (5￠-GGT GCT AGG GGA CCT TCC ATC TAG-3￠)）pLIF cDNA序列(GenBank accession no. AY585336.1)。扩增的cDNA片段(609 bp)被插入到TA克隆载体。用EcoRI and SacI (Takara Bio)消化后，cDNA被插入到鸡β-肌动蛋白基础的启动子（CAG）的下游，在pPyCAG创建PLIF表达载体。此载体转染293FT细胞通过使用脂质体Lipofectamine2000（Invitrogen公司）和条件培养基是收集，过滤，并贮存于 - 70直至使用。 “使用条件培养基1:200，对应于5000U/mL LIF (Supplementary Fig. S1; Supplementary Data are available online at /scd). 猪LIF与人类和氨基酸序列同源性88% and 79%。猪LIF与人类和小鼠LIF的cDNA同