《遗传实验》PPT课件.pptVIP

遗 传 学 实 验;考核;实验一、大蒜根尖有丝分裂染色体标本制备与观察;一、实验目的和要求; 有丝分裂是细胞均等增殖的过程,是体细胞分裂的主要方式。 在各种生长旺盛的植物组织中均存在着有丝分裂。植物根尖是有丝分裂最旺盛的部位，把根尖经过秋水仙素处理，固定，染色和压片，在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。;;有丝分裂中期;有丝分裂末期;1．材料：大蒜根尖 2．器具：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、滴管、解剖针、吸水纸、小烧杯、培养箱、水浴锅、纱布 3．药品：改良品红染液、1N HCl; 1．根尖培养及固定： 大蒜鳞基置于盛水的小烧杯上，25oC培养箱中培养，根长到2cm左右时，上午九时（分裂高峰期），剪取根尖，立即放在卡诺固定液中固定24小时，转入70%的酒精中，4oC保存。 目的：迅速渗入组织和细胞将之杀死，使其形态结构和内含物尽可能保持活时的完整和真实状态。;2．解离： 固定好的根尖，蒸馏水漂洗，放在1M HCl中，60oC水浴解离8-10分钟，蒸馏水漂洗（约10分钟）。 目的：使分生组织细胞间的果胶质分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和染色体容易分散，压平。;3．染色与压片： 取一根尖置于载玻片上，用解剖针把根冠及延长区截去，滴加改良品红染液1-2滴，根尖着色后(约10分钟)，加盖片，用滤纸条在盖片处绕载玻片紧紧缠绕起来，大拇指轻按，再用铅笔的橡皮头适当用力敲打盖片，使染色体渐渐分散，去除滤纸条，吸干多余的染液。;4．镜检： 观察时先在低倍镜下找到分裂相，再用高倍镜观察。 ;五、作业;实验二、植物多倍体人工诱导;一、目的和要求： 了解人工诱导多倍体的原理，并初步掌握用秋水仙素诱发多倍体的一般方法。 ;二、实验原理: 多倍体是指细胞内有三套或三套以上染色体组的生物体。多倍体广泛存在子植物界，有同源多倍体，也有异源多倍体。除了自然界中存在的多倍体外，还可以人工诱发多倍体，其中秋水仙素是效果最好的诱发剂。 秋水仙素作用机理是抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使复制后的染色体不能拉向两极，细胞不能继续分裂，从而导致???色体加倍，形成多倍体细胞。;三、材料、器具和药品： ;四、实验步骤： ;4．解离：取出固定好的根尖，水漂洗２－３次，放在1NHCl中，60oC水浴解离8-10分钟，蒸馏水漂洗。 5．染色与压片：取一根尖置于载玻片上，用解剖针把根冠及延长区截去，滴加改良品红染液1-2滴，根尖着色后(约10分钟)，加盖片，用滤纸条在盖片处绕载玻片紧紧缠绕起来，大拇指轻按，再用铅笔的橡皮头适当用力敲打盖片，使染色体渐渐分散，去除滤纸条，吸干多余的染液。 6．镜检：在显微镜下观察用秋水仙素处理过的根尖与对照组根尖的染色体数目的差异。;作业:;实验三、大葱花粉母细胞减数分裂染色体制备(涂片法)及观察;一、目的和要求;二、实验原理;2、减数分裂过程: 间期(前间期);Meiosis in rice;3.花粉发育过程： ;三、材料、器具和试剂;四、实验步骤;四、实验步骤;2．剥取花药： 从70%酒精保存液中取出花序，选取4枚花蕾：大1，中1，小2置于载玻片上剥取花药。 花药:长度为1-1.5mm 之间为观察减数分裂的适合时期。 花蕾:1.5 毫米以下的花蕾,多无分裂相出现; 1.5-2毫米时,第一次减数分裂前期多; 3-4 毫米之间, 不同时期分裂相多; 4-5 毫米时, 多为第二次减数分裂末期、四分孢子体时期。;3．染色和压片： 方法A:将花药逐个取出, 放在干净的载玻片上,用双面刀片或解剖针从中横断后, 再用解剖针轻轻挤压花药的两端, 使花粉母细胞从切口处逸出,注意去除药壁的残渣。加1-2滴染液，染色10-20分钟，盖上盖玻片, 用橡皮头轻压盖片,注意勿用力过重, 否则会使染色体混乱或四分体细胞分离。 ;3．染色和压片： 方法B：用解剖针将花药横切成3-4段，加一滴染液于材料上，用解剖针轻压花药使花粉母细胞从切口出来，静止染色5-10分钟，除去花药壁。加上盖玻片使染液刚好布满载玻片与盖玻片之间成一薄成（不可过多，过多花粉母细胞会逸出盖玻片边缘），加上盖玻片后，在酒精灯上轻微加热，以利于进一步着色和染色体的分散。在盖玻片上覆以吸水纸用拇指适当加压。把周围的染液吸干（勿使盖片移动）。 ;4．镜检： 观察减数分裂各期染色体的动态变化。;五、作业;实验四、小鼠骨髓细胞染色体制片技术;一、目的和要求： 掌握哺乳动物骨髓细胞染色体标本的制作方法，并观察动物的染色体。 ;实验原理：;材料、器具和药品： ;实验步骤： ;6．固定：加1ml固定液并用吸管轻轻吹匀，放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。 7. 离心：1