电镜—— 透射电镜样品的制备与观察.pptVIP

* * 透射电镜样品的制备与观察 实验目的 掌握透射电镜的成像原理和使用方法,超薄切片 的制备及观察. 实验内容 透射电镜的基本结构 透射电镜的成像原理 透射电镜的使用方法 超薄切片的制备与观察 一、透射电镜的基本结构 电子光学系统 电子枪,磁电子透镜系列,样品室,观察和记录装置. 真空系统 供电系统 二、透射电镜的成像原理 由电子枪发出的热电子在环状正极的吸引下被加速,沿着镜筒冲下, 经聚光 镜聚焦,照射到样品上,与样品发生作用,从而带有了样品的信息, 带有样品信息的电子经过物镜, 中间镜, 投影镜等电磁透镜的依次放大, 最后形成电子显微图象. 三、透射电镜的使用方法 开机 调试照明系统 观察与拍照 换版 关机 四、超薄切片的制备与观察 1.取材: 快 准 轻 小 . 2.固定: 0-4℃,戊二醛－锇酸双重固定 (用缓冲液配制). 固定的目的在于使离体组织细胞尽量保持原有的形态结构. 3.漂洗: 用同系列缓冲液,避免残留固定液在其后固定或脱水中还原生成 组织内电子不透明沉淀物. 4.块染: 加强反差,醋酸双氧铀酒精溶液,30-60分钟. 5.脱水: 用脱水剂置换样品中的游离水, 常用酒精或丙酮. 6.浸透: 使包埋剂逐步浸入细胞内,取代脱水剂 ,环氧丙烷/包埋剂. 7.包埋: 纯包埋剂,37度过夜,45度12小时,60度48小时,将浸透好的样品 块放在胶囊或模具中,注入包埋剂包埋,经加温聚合,即成包埋块, 去胶囊,保存于干躁器中. 8.超薄切片: 能否切出没有刀痕,没有震颤,厚薄均匀, 平整无皱折的切片 是超薄切片中的中心环节,这取决于切片机的性能,切片刀的质量 包埋块的软硬,操作者的经验与耐心. (1) 制备支持膜 (2) 包埋块的修整 (3) 刀的制作 (4) 切片 (5) 收集切片 9.切片的染色: 超薄切片的染色,目的是提高生物样品的反差.一般用重金属 盐进行染色. 10.透射电镜样品的观察: 为能独立分析电镜图像和照片的资料,应掌握以下要领: (1)正确使用放大率 (2)对组织和细胞的初步鉴定 扫描电镜样品的制备与观察 实验目的 掌握扫描电镜的成像原理和使用方法,样品 的制备及观察 实验内容 扫描电镜的基本结构 扫描电镜的成像原理 扫描电镜的使用方法 样品的制备及观察 一、扫描电镜的基本结构 电子光学系统 电子枪 系列电磁透镜 扫描装置 样品室 信号检测与转换系统 信号的显示与记录系统 真空系统和供电系统 二、扫描电镜的成像原理 扫描电子显微镜(SEM)是将电子枪发射的细电子束照射在样品上, 并在 样品表面连点逐行进行光栅扫描 . 入射电子将激发样品出射描述表面结构的 二次电子等信息,再经探测器收集,施以信号放大,最后成像在显像管荧光屏上, 反映出作品表面形貌的图像 . 二次电子的发射量,是依赖电子束人射点的结构 状态而变化, 样品表面结构的凹凸不平, 导致了反映结构凹凸信息的二次电子 量的不同, 这样就形成了SEM图像的反差. 所以扫描电镜的图像反差与光镜和 透射电镜图像反差来源有本质的区别. 扫描电镜放大倍数界于光镜与透射电镜之间,通常是从500 倍到 5000倍, 其分辨能力为3nm.SEM的最大特点是图像三维立体感强. 三、扫描电镜的使用方法 开机、 换样品 、 观察与拍照、 关机