第二十一章基因诊断与基因治疗 33页.pptVIP

导入的方式 治疗靶基因的选择 载体系统——运送基因的工具 四、基因治疗 腺苷脱氨酶(ADA)缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID) 治疗基本步骤 ADA基因 + 逆转录病毒载体 导入患者淋巴细胞 体外扩增 回输病人体内 淋巴细胞ADA酶恢复至正常水平的5%-10% 维持免疫系统功能，改善病人症状 * 疾病的根本原因：疾病的各种表型的改变是基因 的改变造成的。 一、 基因诊断 (Genetic Diagnosis) 基因诊断的基本操作流程包括： 核酸抽提 → 目的序列扩增 → 分子杂交和信号检测 基因诊断主要是针对DNA分子的遗传分析技术，包含定性和定量两类分析方法。 基因诊断的原理 DNA诊断——检测相关基因的结构及其表达功能 特别是RNA产物是否正常。 RNA诊断——对表达产物mRNA质和量变化的分析。 基因诊断的方法 定性 免疫组织化学 定性 免疫荧光 定量 酶联免疫吸附测定（ELISA） 定性 Western印迹 蛋白质 定量 cDNA芯片技术 定量 实时RT-PCR 定量 RT-PCR 定性 Northern印迹 RNA 定量 实时PCR（Real-time PCR） 定性 Southern印迹 DNA （1）DNA诊断 斑点杂交 等位基因特异寡核苷酸探针 (allele apecific oligonucleotide, ASO) PCR/单链构象多态性分析 (single strand conformation polymorphism, SSCP) 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性分析 (restriction fragment length polymorphism, RLFP) RNA印迹 (Northern blot) 是检测基因是否表达、表达产物mRNA的大小及基因表达的效率。 RT-PCR （2）RNA诊断 基因诊断的优点 1、不受材料来源影响 外周血、活体穿刺组织、孕妇外周血、血斑等 2、症状前诊断 尤其对于一些延迟显性疾病如Huntingtong舞蹈病 3、产前诊断 避免患儿出生，提高人口质量 基因诊断的应用 1、遗传疾病 2、感染性疾病 3、恶性肿瘤 4、法医学 1、遗传性疾病的分子诊断 迪谢纳肌营养不良 (Duchenne muscular dystrophy, DMD)是一种高发病率、高致残、高致死的X染色体连锁的隐性遗传性疾病，在2500~3500个活产男婴中即有一个患者。 致病基因DMD位于Xp21.2-21.3，全长为250kb，有79个外显子。 DMD的最主要遗传缺陷是外显子缺失，约占60~70% 检测DMD基因的技术：Southern印迹、多重PCR 多重PCR 在一个PCR体系中加入数对PCR引物， 覆盖区域不重叠 用于检测同一基因多个外显子的缺失 E1 E2 E3 * * DMD基因外显子缺失的检测 2、感染性疾病的分子诊断 定性或定量检测致病微生物的核酸，已经用于病毒、细菌和寄生虫感染的诊断。 动态、定量地检测病原体核酸能对疗效判断和病情预后提供客观的依据。 SARS相关冠状病毒的分子诊断 检测标本： 痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、血浆、粪便。 检测方法： 1、逆转录-巢式PCR 2、逆转录-实时PCR 病人和接触者（具临床症状）的痰液中经PCR检测到了病毒。 病人的其它标本经PCR检测到病毒 检测病毒的3种方法（血清学检测、病毒分离、PCR技术）中，PCR技术的检出率最高。 结 果 疾病的早期即可获得阳性结果（早于血清转换期）。 痰液中病毒RNA浓度极高，说明病毒从呼吸道排放是主要传播途径。 血清中检测到极低浓度的病毒RNA，提示病毒复制不仅发生于呼吸道。 病人恢复晚期的粪便中存在病毒RNA，说明粪便可能也是一种传播途径。 鼻、咽拭子中含有的病毒RNA显著少于痰液，提示不适合作为标本（有可能漏检）。 讨 论 其他感染性疾病的诊断 HBV病毒 HIV病毒 肿瘤是由于遗传物质（肿瘤相关基因）发生突变而导致的疾病。 肿瘤相关基因的突变知识增加了个体对肿瘤的易感性，而并不一定马上产生肿瘤。 肿瘤的发生是一个多因素、多步骤的过程。 生物芯片技术在今后的肿瘤发病机制研究和肿瘤的诊断等方面将发挥越来越显著的作用。 3、肿瘤相关基因的检测 个人辨识 亲子鉴定 性别鉴定 4、法医学上的应用 定义：基因治疗是指改变以人遗传物质为基础的 生物医学治疗，即通过