2007版0101赤霉酸A3工艺规程.docVIP

前 言 本标准是根据Q/RFJ2040101-2002《“九二○”工艺规程》修订的。 本标准代替Q/RFJ2040101-2002 《“九二○”工艺规程》。 本标准与Q/RFJ2040101-2002相比较，主要变化是： ——将标准名称修改为《赤霉酸A3工艺规程》； ——调整了菌种选育的种子和发酵摇瓶配方及三级发酵的种子培养基配方； ——增加了发酵空气过滤器的过滤介质内容； ——在高温季节，种子和发酵培养的罐温控制改在27℃～30℃； ——发酵培养的通气量由1:(1.0±0.3)v/v/min改为1:(0.7±0.3)v/v/min； ——将超纳滤工序单独浓缩改为将超纳滤与薄膜浓缩联机浓缩。 ——去掉了乙酸丁酯洗粉，将乙酸乙酯洗涤次数由1次～2次改为2次～3次； ——将萃余液排至污水处理系统处理改为进行乙酸乙酯回收后再处理。 ——将冰水温度控制上限调高3℃，将循环水压由0.30MPa±0.05MPa调整为＜0.35MPa。 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由生产部提出并归口。 本标准起草单位：生产部。 本标准主要起草人：张金儿。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——Q/RFJ2040101-1999，Q/RFJ2040101-2002。 审 核： 批 准： 更改控制表序 号 更改通知单号 更改形式 更改页码 更改人 更 改 日 期 备 注 划 改 换 页 第一篇 赤霉酸A3工艺概况及菌种规程 3 工艺概况 　　采用深层培养法生物合成生产赤霉酸A3。培养基由淀粉、葡萄糖、花生饼粉、黄豆饼粉、磷酸盐等组成。在整个培养过程及移种中，严格保持纯种或无菌状态。 　　生产时，先将液体石蜡或液氮保存之菌原种用无菌方法取少量制成悬浮液再移到大米上扩大菌丝量。培养成熟后制成悬浮液，接种于种子罐中进行培养，再移到发酵罐中进行培养。 　　种子培养及发酵过程中，保持一定罐温、罐压，通入适量无菌空气，并不断搅拌。 4 菌种规程 4.1 生产用菌种 　　目前生产用菌种为产赤霉素的藤仓赤霉菌（Gibberellafuji kuroi）。生产用菌种代号按菌种来源或选育代号确定。为维持其生产活力，在固体培养基上长好以后，以无菌液体石腊封存于0℃～5℃冰箱内或用液氮保藏法、超低温冰箱保藏法保存。在用于生产前应严格检查，证明无染菌，方可供生产使用。 4.2 孢瓶制备及菌种保存 4.2.1 原料规格 　　大米：标粳大米，色白、粒圆透明，均匀无白梗，无糯粘性。 　　液体石蜡：化学试剂（CP－AR），馏出温度不低于300℃。 4.2.2 工艺流程 接1mL菌丝悬浮液 28℃培养 用具准备及空消—→大米准备及蒸煮—→大米茄瓶实消─────—→大米孢瓶制备──—→ 　　　　　　　　　　　　　　　 3d～5d 　┌──→冰箱保存（0℃～5℃） ─┼──→液蜡封存（0℃～5℃） 　└──→摇瓶发酵（验证生产水平） 4.2.3 大米培养基配制 　　取无霉蛀标粳大米，1:0.7比例（可根据大米情况适当调整）的大米及自来水蒸煮30min～40min成饭，摊开凉后分装到无菌空茄瓶内，每瓶装22g±2g，包扎好后实消。 4.2.4 大米孢子制备及保存 　　挑取液体石蜡封存无异常的赤霉素菌丝于盛有玻璃珠及无菌水的三角烧瓶中，振摇数分钟，制成悬浮液，吸１mL接入经灭菌过的大米孢瓶内，在培养间敲匀，放28℃培养20h左右。再敲匀一次，摊成斜面，放28℃培养3d～5d。待大米表面形成大量丰满的白色绒毛状菌丝，置0℃～5℃冰箱内保存，保存期不超过1个月。 将液体石蜡经124℃高压灭菌1h，间歇灭菌2次～4次。在37℃放置数天，待液蜡澄清后，在无菌室以无菌操作手续将液蜡倒入已长好的大米孢瓶内，液蜡加入量以覆盖斜面并高出1㎝左右为准，置0℃～5℃冰箱保存，并标明菌种名称、编号、代数及制备日期、封存日期，保存使用期不超过1年。 4.3 无菌试验 4.3.1 原料规格 　　名称 蛋白胨 牛肉膏 葡萄糖 氯化钠 酚红 酵母膏 琼脂 　　规格　 BR　　　BR　　　CP　　 CP　 CP 　　BR　　 BR 4.3.2 工艺流程 　　　　　　　　　　 37℃ 用具准备——→取样——→划碟——→培养——→检查——→报告 4.3.3 细菌肉汤与细菌固