第十七章病理学常用技术的原理及用_病理学课件.ppt

 第十七章 病理学常用技术的原理及应用 提纲 大体与组织病理学技术 组织化学与免疫组织化学技术 电子显微镜技术 原位多聚酶链式反应技术 核酸原位杂交技术 显微切割技术 流式细胞技术 比较基因组杂交技术 生物芯片技术 激光扫描共聚焦显微技术 大体与组织病理学技术 （一）大体观察 主要运用肉眼或辅以放大镜、量尺和磅秤等工具，对大体标本的病变性状（形状、大小、重量、色泽、质地、表面及切面形态、与周围组织和器官的关系等）进行细致地解剖、观察、测量、取材和记录，必要时可摄影留作资料。大体观察不仅是病理医师的基本功和正确病理诊断的第一步，也是医学生学习病理学的主要方法之。 肿瘤大体观察 注意肿瘤的部位，形态、大小、颜色以及与周围组织关系，有无完整或不完整的包膜，测量肿瘤的体积，包括长度、阔度、高度（厘米），实质性肿瘤量直径，浅表部的肿瘤应注意其与皮肤的关系，是否凸出皮面，与皮肤有无粘连，四周有无正常的皮肤组织。 注意肿瘤的质地（硬实、中等、软）各处的坚实度是否一致，有无与周围组织粘连的情况。 切面应暴露肿瘤的最大面积，以便较全面观察肿瘤内部，巨型肿瘤应多作平行切面； 注意肿瘤切面的形状，大小和颜色，在结构上是否均匀一致，有无出血坏死，有无包膜，有无浸润； 包埋组织块的选择：根据肿瘤的大小决定包埋组织的块数，原则上选择肿瘤中央； 肿瘤边缘与瘤外组织相连部份，包括瘤外组织； 肉眼所见的不同性状的各部份； 所有淋巴结作包埋。 取材 检查标本，观察其大小形态、色泽、硬度及肉眼病理改变并进行描述。检查病变部位应按诊断的实际要求取材，组织块厚度不超过0.3cm，大小在22×22mm范围内，放入用铅笔写好号码的组织脱水盒内，每合原则上放一块（小块组织例外），如放入两块以上者，应在组织脱水盒上号码后注明A、B、C……字样，以便区分. 制片工作常规 【 组织处理机脱水程序和时间 】 10%福尔马林 11小时； 85%乙醇 30分钟； 95%乙醇Ⅰ 30分钟； 95%乙醇Ⅱ 30分钟； 无水乙醇Ⅰ 30分钟； 无水乙醇Ⅱ 30分钟； 无水乙醇Ⅲ 30分钟； 丙酮 20分钟； 二甲苯Ⅰ 20分钟； 二甲苯Ⅱ 20分钟； 石蜡 30分钟； 石蜡 30分钟。 石蜡包埋 包埋时先将融蜡倾入模型，然后以钝头热镊夹取组织块，使病灶或指定面向下（包埋分层次的组织在蜡中安放平正。注意防止混杂组织碎屑； 组织埋入蜡块中以后，即将该组织的号码小条埋入蜡块一侧； 蜡稍凝后，即移入冷水中加速凝固； 蜡块的大小，以在组织周围包有1~2mm之蜡为宜。蜡块做成正方形或长0方形，以便切片。 石蜡切片法 将切片刀装在持刀座上，刀刃与蜡块表面呈50夹角。调整后勿任意变动； 将蜡块固定于持蜡器上，并调整蜡块与刀至适当位置； 移动刀座或持蜡器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座； 以右手匀速旋转机轮，到组织已全部切出，或所需的部分已切出。微小组织应注意勿修切过多。调节厚薄器到4～6um，继续切片，除特殊要求者，一般勿切过厚； 以小镊取完整无划痕、厚薄均匀的切片，将其放入温水中，使展平无折，每一蜡块多切数个切面，选择较好的切片裱于载玻片上。需要多个不同水平切面时，应多选切片。水浴温度以低于蜡熔点10~12℃上下为宜； 裱片时使切片玻片之间无气泡，切片的位置应端正，裱成后随即在玻片上写上号码； 将切片放在烘片板或温箱中烘干； 有特殊要求者应按要求切片。 染色常规 切片脱蜡应彻底，室温较低时更应注意，以切片在二甲苯中呈透明状，或移入乙醇后，片上无白色斑点为佳； 特殊染色、组织化学反应，按各方法的要求进行组织固定处理，以保证效果。对酶反应更应严格要求。凡用含升汞固定液固定的组织，于切片脱蜡后，应经脱汞处理，方可染色。其法为：切片经水洗2min，浸于0.5%碘酊溶液中10min，水洗；0.5%硫代硫酸钠水溶5min，用水彻底冲洗；经蒸馏水洗后染色。在脱汞过程中，慎防切片脱落； 各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料着色效果常因生产厂和批号不同而异，启用任何新品，均应先试染。配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签应写明名称、含量、配制年月日，顺序保存于避光橱中，必要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当； 染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响。可根据镜下观察所见酌予调整，但对组织化学反应（尤其是酶），其时间、温度等因素务必恒定，且应做对照片。染液着色力显著减退时应更新，染色反应不正常，应检查染液及试剂是否失效或误用； 染色过程中，勿使切片干燥，以免