野黄芩苷对人舌鳞癌tca8113细胞细胞周期及fasfasl介导的细胞凋亡的影响-effects of scutellarin on cell cycle and fasfa sl - mediated apoptosis in human tongue squamous cell carcinoma tca 8113 cells.docxVIP

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞细胞周期及Fas/FasL介导的细胞凋亡的影响中文摘要舌鳞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一，发病率占口腔癌的39.95%，恶性程度较高，生长快，易发生早期淋巴结转移。目前临床多采用以手术治疗为主，放、化疗为辅的综合治疗方法，但术后复发率及转移率均较高，因此寻求新的治疗途径及有效的治疗药物具有很大的临床意义。中药野黄芩苷又名灯盏花乙素,是从黄芩茎叶及灯盏细辛等药物中分离得到的黄酮类化合物。已有研究证实黄酮类化合物在抗炎、抗微生物、抗变态反应、抗肿瘤等多方面都有一定的药理作用[1]。本研究观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞细胞周期及Fas/FasL介导的细胞凋亡的影响，旨在探讨野黄芩苷可能抗肿瘤的作用机制，为野黄芩苷药理作用的进一步研究提供理论和实验依据。目的：体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞株，检测野黄芩苷作用的人舌鳞癌细胞细胞周期改变及Fas、FasL蛋白的表达情况，观察野黄芩苷对人舌鳞癌细胞细胞增殖及凋亡的影响，探讨野黄芩苷的抗肿瘤作用。方法：1、人舌鳞癌Tca8113细胞株购于南京凯基生物科技有限公司，进行体外培养，用于实验。2、实验分组：分为对照组、不同浓度野黄芩苷药物组。对照组用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养液培养舌鳞癌细胞；野黄芩苷组根据预实验结果选择用浓度为80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷培养液处理细胞。3、采用流式细胞技术观察野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48小时后细胞周期的变化。4、采用免疫细胞化学法观察野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48小时后Fas、FasL的表达情况。5、采用蛋白印迹(Western-blot)技术检测野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48小时后Fas、FasL蛋白的表达情况。6、数据处理采用SPSS17.0统计学软件进行，对结果采用单因素方差分析，P0.05表示差异有统计学意义。结果：1、流式细胞术检测结果显示：随着加入野黄芩苷浓度的增加，舌鳞癌细胞G1%（DNA合成前期细胞所占百分比）升高，而S%（DNA合成期细胞所占百分比）降低，与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)；且这种变化与药物浓度的变化有关，其中以160μg/ml浓度的野黄芩苷抑制作用最强。2、免疫细胞化学染色结果：80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml野黄芩苷作用于Tca8113细胞48h后，Fas和FasL阳性细胞胞浆和胞膜呈棕黄色。对照组细胞胞浆着色很浅，随着药物浓度的增加，细胞胞浆棕黄色逐渐增强，免疫细胞化学染色阳性程度明显高于未经野黄芩苷作用的对照组。经统计学分析，各组之间差异具有统计学意义(P0.05)，以160μg/ml浓度的野黄芩苷作用最强。3、Western-Blot检测结果：80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml野黄芩苷作用于Tca8113细胞48h后，Western-Blot检测对照组Fas、FasL蛋白表达水平较低，不同浓度野黄芩苷药物组随着药物浓度的增加，Fas、FasL蛋白表达量有增高趋势，与对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）。结论：1、野黄芩苷可通过阻止人舌鳞癌Tca8113细胞从G1期进入S期，抑制肿瘤细胞增殖；2、野黄芩苷可能通过提高人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白的表达诱导凋亡而达到抗肿瘤的作用。关键词：野黄芩苷；Tca8113细胞；细胞周期；Fas；FasLTheeffectsofgrowthinhibitionandapoptosisinductionofscutellarinonTca8113humantonguecancercellsABSTRACTTonguesquamouscarcinomaisoneofthecommonmalignanttumorsoforalandmaxillofacialregionatpresent.The39.95%oftheincidenceinoralcavitycarcinomaistonguesquamouscarcinoma.Thepropertiesofthiscanceraregrowth-fast，highlymalignant，easilylymphnodemetastasis.Clinictreatmentcomprehensivelyusedpresentlyaresurgery，radiotherapy，chemotherapyetc，buttheincidenceofpostoperativerecurrenceandmetastasisishigher.Ithasgreatclinicalvaluetoexplorepositivelyeffectivepreventivem