血管内皮生长因子血清水平 基因位点936ct多态与非小细胞肺癌的相关性分析-correlation analysis between 936 ct polymorphism of vascular endothelial growth factor serum level gene locus and non-small cell lung cancer.docxVIP

血管内皮生长因子血清水平、基因位点+936C/T多态与非小细胞肺癌的相关性研究摘要肺癌是目前发病率很高的恶性肿瘤，在上世纪70年代，我国开展了第一次全民性的死因回顾调查，该调查表明，我国当时肺癌的死亡率约为5.47/10万，在所有癌症死因中，排在胃癌、肝癌、食管癌及宫颈癌之后，排于第五位，在所有癌症死因中约占7.43%。但与同期世界范围内的肺癌死亡率对比中，我国还处于较低水平。在上世纪90年代，我国开展了第二次全国性的死因回顾调查，在该调查结果中，肺癌的死亡率上升为17.27/10万，排在所有癌症死因中的第3位，胃癌及食管癌分别居于第1、2位。2000-2007年部分年份发病率居前五位的癌谱中，肺癌一直处于癌谱的首位，而且其中有80%为非小细胞肺癌。2012年，我国肿瘤防治办公室的调查显示，目前我国的肺癌死亡率已跃居恶性肿瘤死亡原因中的首位，占恶性肿瘤死亡原因中的27.93%(Fig.1)。因此，了解肺癌尤其是非小细胞肺癌的分子生物学和病因学机制将是进行有针对性的治疗和个体化用药的关键。肺癌的发生、发展及转移等不仅与肿瘤自身无限增殖的生物学特性有关，而且更要依靠宿主环境中营养的供给，有研究报道，当肿瘤的直径达到2mm左右，其原有血管已不能满足自身的营养需求，因而需要更多新生血管来提供营养支持以及代谢废物的转运。研究发现血管内皮生长因子（VEGF），不论机体处于正常生理状态下还是病理状态下，对于新生血管的生成均有着极其重要的作用，而且在恶性肿瘤的发生、发展中也有着重要作用。通过体内外的实验证据表明，高水平的VEGF表达与肿瘤的生长和转移相关，而且通过控制VEGF的信号转导能够抑制肿瘤血管生成和肿瘤自身的生长。虽然近年来已有大量的关于VEGF的文献报道，但对于VEGF基因中的单核苷酸多态性与肺癌之间联系的研究报道却有很多争议以及不确定性，同时在我国国内关于VEGF基因中的单核苷酸多态性与肺癌之间联系的研究更是鲜有报道，本次实验的研究重点是通过讨论血管内皮生长因子血清水平、基因位点+936C/T多态与人群中非小细胞肺癌遗传易感性的关系，进而为非小细胞肺癌的早期风险性评估、早期诊断与预防以及相应的治疗等诸多方面提供依据。1目的：本次研究旨在分别检测非小细胞肺癌患者与正常体检者血清中VEGF的浓度和血细胞中VEGF基因中单核苷酸位点+936C/T多态，探讨VEGF血清水平与非小细胞肺癌发生和发展的关联性，并进一步探讨VEGF基因中单核苷酸位点+936C/T多态与非小细胞肺癌的遗传易感性的相关性。方法：1研究对象的选取选取承德中心医院2010年9月到2012年5月间经由病理确诊的非小细胞肺癌患者80例，且所有患者均无影响实验结果的血管性病变，采血前未经过任何手术、放疗、化疗或免疫治疗，其中包括52例男性患者，28例女性患者，年龄为45～72岁，中位年龄为55岁，按照世界卫生组织肺癌分类标准：鳞癌患者32例，腺癌患者36例，大细胞癌患者8例，腺鳞癌患者4例。对照组的选取为同期无影响实验结果的血管性病变的健康体检者80例，其中包括54例男性，26例女性，年龄为35～76岁，中位年龄为52岁。2标本的采集及处理1.标本采集：在清晨空腹状态下，用EDTA管收集符合入选标准的受检者的静脉血4ml，取血后即刻离心，按要求在每分钟3000转的条件下离心15分钟，离心完成后，将其中的上清液移到eppendorf离心管内，然后将上清液和离心沉淀物放于-80℃冰箱中保存，待测。2.标本处理：用双抗体夹心—酶联免疫吸附实验法（即ELISA法）定量测定VEGF血清水平。对于血细胞沉淀物，首先严格按照Wizard基因DNA纯化试剂盒的说明书进行DNA的纯化提取，然后采用聚合酶链式-连接酶检测反应实验法（即PCR-LDR法）检测血细胞的VEGF基因中单核苷酸位点+936C/T（rs3025039）进行分型。3统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。VEGF血清水平的计量资料测定结果采用x±s表示，统计方法采用独立样本T检验，患者VEGF血清水平与不同性别及不同病理类别间的比较采单因素方差分析。SNP分型首先采用遗传平衡定律检验其分布是否符合Hardy-Weinberg平衡；连续变量资料采用T检验分析，分类变量资料采用?2检验分析。Pearson?2检验比较组间的基因型分布差异。非条件逻辑回归分2析分析基因型与非小细胞肺癌发病风险的关系，关联度用相对危险度及其95%可信区间表示。所有的统计学检验均为双侧检验，P0.05为差异有统计学意义。结果：1非小细胞肺癌组的VEGF血清浓度显著高于对照组，P=0.001(P0.05)，差异具有统计学意义；2非小细胞肺癌组内不同病理类别间VEGF血清浓度的差异无统计学意义P=0.151（P0.05），不同性别间VEGF