选择性环氧合酶-2抑制剂ns-398联合奥曲肽抑制结肠癌的研究-study on selective cyclooxygenase - 2 inhibitor ns - 398 combined with octreotide in inhibiting colon cancer.docxVIP

目 录 中文摘要????????????????????????????? 1 英文摘要????????????????????????????? 3 论文正文 1．前 言………………………………………………………………………………………... 5 2．材料与方法…………………………………………………………………………..…… 7 3．结果………………………………………………………………………………….….… 15 4．讨论…………………………………………………………………………………..…… 20 结论……………………………………………………………………………………………. 26 参考文献……………………………………………………………………………………… 27 附图……………………………………………………………………………………….…… 30 致谢………………………………………………………………………………………….… 41 附录 附录 A 英文缩略词表………………………………………...……………………... 42 附录 B 试剂配制……………………………………………………………..……..… 43 附录 C 研究生学习期间发表的文章………………………………………...…… 45 附录 D 综述…………………………………………………………...……………..… 46 PAGE PAGE 10 选择性环氧合酶-2 抑制剂 NS-398 联合奥曲肽 抑制结肠癌的研究 中 文 摘 要 目的：探讨选择性环氧合酶-2 抑制剂 NS-398 与奥曲肽联合应用对人结肠腺癌细胞 株 Lovo 生长、凋亡的影响，研究两药联用是否具有协同性及相关机制，为临床治 疗提供新的思路和理论依据。 方法：实验分为对照组，单纯 NS-398 组（100μmol/L），单纯奥曲肽组（1μmol/L） 和 NS-398 联合奥曲肽组（以下简称联合组，100μmol/L NS-398+1μmol/L 奥曲肽）， 将各组药物应用于体外培养的人结肠腺癌细胞株 Lovo 不同时间：①观察生长曲线 的变化；②倒置显微镜观察细胞形态学变化；③四甲基噻唑氮蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测细胞生长抑制效应；④流式细胞仪（flow cytometer, FCM）检测细胞周期、凋亡率；⑤透射电镜（electronic microscopy, EM）观察 细胞超微结构变化及凋亡形态变化；⑥RT－PCR 法检测 COX-2 基因的表达。 结果：①药物作用后，细胞生长受抑制，出现负增长，联合组作用明显强于单纯 用药组。②倒置显微镜下，见正常情况下 Lovo 细胞生长良好，表现为不规则多边 形，贴壁生长，呈单层鹅卵石样紧密排列，有较长的伪足，可融合成集落，并有 多量瘤巨细胞出现。经药物处理后，细胞变小、变圆，排列杂乱，细胞伪足回缩， 部分细胞脱落漂浮于培养液中，出现悬浮现象，瘤巨细胞减少或不见瘤巨细胞， 联合组细胞形态学改变显著强于单纯用药组，且存在时间依赖性。③MTT 法显示 NS-398 和奥曲肽均在一定范围内呈时间依赖性抑制 Lovo 细胞的增殖；联合用药组 抑制率显著高于单一用药组（P0.01），提示联合用药有协同抑制 Lovo 细胞增殖 效应，并随着作用时间延长而增强。④FCM 检测可见药物影响 Lovo 细胞的细胞周 期分布，使 G0/G1 期比例增高，使 S 期比例降低，用药组与对照组之间，联合组与 单纯用药组之间差异具有显著性(P0.05)。在 G0/G1 期前出现一亚二倍体峰，确认 为凋亡峰，联合组该峰面积大于单纯用药组，且存在时间依赖性。同时，FCM 检测 显示随着作用时间的延长，细胞凋亡率逐渐增加，联合组细胞凋亡率显著高于单 一用药组（P0.01）。⑤透射电镜下正常 Lovo 细胞结构完整，核仁、核膜清晰， 染色质分布均匀。药物作用 24h 后出现细胞凋亡的形态改变，主要表现为细胞核 固缩，胞质空泡化，出现大小不一的空泡及胞质崩解，可见线粒体肿胀，部分细 胞胞膜破裂，核内染色质聚集于核膜内侧呈团块或新月状，并可见凋亡小体形成。 ⑥药物作用于 Lovo 细胞后，可以使 COX-2 基因表达下调，联合组下调效果明显高 于对照组和单一用药组（P0.05）。 结论：1.选择性 COX-2 抑制剂 NS-398 和生长抑素类似物奥曲肽可以抑制人结肠腺 癌细胞株 Lovo 的生长、增殖，联合用药具有协同抑制作用，并呈时间依赖性。 2.NS-398、奥曲肽可以诱导 Lovo 细胞的凋亡，联合用药显著提高 Lovo 细胞的凋 亡率，呈时间依赖性，并改变细胞周期分布，使 G0/G1 期比例增高，S 期比例降低