新型喹唑啉类化合物生物活性测定及定量构效关系分析-biological activity determination and quantitative structure-activity relationship analysis of novel quinazoline compounds.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 新型喹唑啉类化合物生物活性测定及定量构效关系研究 摘要 在自身免疫耐受及移植免疫耐受的诱导和维持中 CD4+ Foxp3+ Treg 起重要 作用。通过免疫抑制剂诱导特异性的 CD4+ Foxp3+ Treg 细胞，将提高器官移植 受者免疫耐受的敏感性，有利于器官移植物的长期存活及移植免疫耐受的建立。 目前，临床上使用的免疫抑制药物主要有环孢素、他克莫司、霉酚酸酯等。以 雷帕霉素为代表的第三代免疫抑制剂在避免移植排斥反应的同时，也具有部分诱 导 CD4+ Foxp3+ Treg 细胞的能力，逐渐成为免疫抑制剂中的主力军。因此，开 发具有显著诱导调节性 T 细胞能力的新型免疫抑制剂是免疫抑制药物研发的重 要发展方向。 化合物进入体内后其作用模式是一个连续且复杂的过程，因此探明其在体内 及体外免疫抑制模式及分子作用机制至关重要。本研究通过前期大量的实验，筛 选出一种具有诱导人外周血 T 淋巴细胞向 Treg 细胞分化的喹唑啉类化合物。为 进一步提高其诱导免疫抑制的效果，本课题进行了分子模拟及定量构效关系研 究，并在此基础上设计、合成了一系列新型喹唑啉类化合物，通过对体内及体外 细胞生物学活性的初步探讨，及时地为化学合成反馈信息，以期为高特异性、高 活性的新型免疫抑制剂的研发奠定理论基础。 本课题研究的主要内容如下： 1) 新型喹唑啉类化合物的设计 采用分子对接技术模拟药物分子在 JAK3 活性位点处的结合模式，并借助 SYBYL6.9 分子模拟软件进行分子结构特征与免疫抑制活性间的三维定量构效 关系研究，基于上述信息设计新型喹唑啉类化合物； 2) 新型喹唑啉类化合物的合成及结构鉴定 以 2-氨基-4,5-二甲氧基苯甲腈及 2-氨基-5-R-苯甲腈（R：F、Cl、Br、CF3、 CH3、NO2）为原料合成 6,7-二甲氧基-4-环戊胺喹唑啉及 6-R-4-环戊胺喹唑啉（R： F、Cl、Br、CF3、CH3、NO2、NH2）。通过高效液相色谱（HPLC）分析纯度并 使用质谱测定相关分子量； 3) 新型喹唑啉类化合物的生物活性测定 体外活性：采用 CFSE 标记细胞技术及 Annexin V-FITC/PI 双染色法检测合成 化合物的体外生物学活性； I 重庆理 重庆理工大学硕士学位论文 体内活性：用 ΔLM-OVA 细菌免疫 C57B1/6 小鼠后，让其服用上述化合物。 7 天后，取外周血并分离淋巴细胞，通过流式细胞术检测 CD8+IFN-γ+T 细胞的比 例，以此鉴定化合物的体内活性。 通过上述研究，取得了以下研究成果： 1) 利用分子模拟及三维定量构效关系研究，成功地设计出 8 个新型喹唑啉类化 合物，即 6-R-4-环戊胺喹唑啉（R：F、CI、Br、CF3、CH3、NO2、NH2）与 6,7-二甲氧基-4-环戊胺喹唑啉。经高效液相色谱及质谱鉴定化合物纯度均为 100%； 2) 通过流式细胞术检测细胞表面 CFSE 荧光强度，可发现该类化合物均对细胞 增殖具有抑制作用，其中以 6,7-二甲氧基-4-环戊胺喹唑啉及 6-R-4-环戊胺喹 唑啉（R：Br，CF3）的抑制作用最为明显，且该抑制作用与浓度呈正向相关 性； 3) Annexin V-FITC/PI 双染色法结果证明，8 种化合物均对细胞具有凋亡诱导效 应，且与上述结果相似，以 6,7-二甲氧基-4-环戊胺喹唑啉及 6-R-4-环戊胺喹 唑啉（R： Br，CF3）的效果最为显著。随着喹唑啉类化合物浓度增高，细 胞凋亡数逐渐增加，呈现一定的量-效关系； 4) 在 ΔLM-OVA 细菌免疫后，服用喹唑啉类化合物的实验组小鼠相对空白组小 鼠，其 OVA 特异性 CD8+IFN-γ+T 细胞比例明显降低（P0.01）。 研究结果表明：本课题所设计的新型喹唑啉类化合物不仅在体外具有较强的 生物活性，能有效地抑制细胞增殖并诱导其发生凋亡，且对体内效应 CD8+T 细 胞的应答能力也表现出明显的抑制作用。作为 JAK3 酪氨酸蛋白激酶候选抑制剂， 该系列化合物具有高效、特异、安全等优点。本研究初步证实了喹唑啉类化合物 临床应用的可能性，并为更深层次的科学研究奠定基础。 关键词： 喹唑啉类化合物；计算机辅助药物设计；免疫抑制剂 II Abs Abstract Biological Activity Determination and Quantitative Structure-Activity Relationship Studies of Novel Quinazoline Compounds Abstract CD4+ Foxp3+ Tregs induced by immunosuppressive agents, which pla