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LMNA基因突变致家族性扩张型心肌病 中山二院心内科 王景峰 袁沃亮 前言 家族性扩张型心肌病（familial dilated cardiomyopathy，FDC)，定义为至少有2个有紧密血缘关系的家庭成员有DCM 。 FDC的病例在逐步增加，目前占DCM的比例约为20-50％。 前言—FDC的遗传方式 常染色体显性遗传(autosomal dominant，AD)，目前至少16个基因被发现可引起FDC； 占FDC90％以上 X染色体伴性遗传（X-linked ）：主要见于DMD/BMD(肌营养不良)； 常染色体隐性遗传(autosomal recessive，AR)：很少 最常见的是编码β-肌球蛋白重链的MYH7基因以及编码 lamin A/C蛋白的LMNA基因 前 言 ■ 2005年3月发现一名扩张型心肌病合并心房纤颤及Ⅲ度房室传导阻滞的患者，其伴有肢带型肌营养不良（LGMD）； ■家族中有多名类似的肌病患者，合并心脏损害， 是一个家族性扩张型心肌病的家系。 ■展开家系调查；并以LMNA基因作为候选基因进行突变的筛选检测，以阐述其分子遗传学机制。 资料与方法： 该家系共30人 4代共9名患者，目前存活的患者共5人，病史在15~38年间。 临床表现：缓慢进展的四肢无力、肌肉萎缩、肌张力减退，以肩带及盆带部明显，走路呈“鸭步”，无腓肠肌假性肥大。 实验方法 血清：心肌酶（谷草转氨酶、肌酸磷酸激酶、肌酸磷酸激酶-同功酶MB、乳酸脱氢酶、乳酸脱氢酶-同功酶1）、C反应蛋白及肌钙蛋白T。 所有成员行心电图、超声心动图检查 肌肉活检 ：4位患者及一个表型正常者 病理学方法：苏木素-伊红染色（HE 染色）、免疫组化Dystrophin染色 异常基因检测 家系中患者临床特点符合LGMD-1B的表现。 根据分子生物学的研究提示，LGMD-1B与位于1q21上的核纤层蛋白LaminA/C编码基因突变相关。 以核纤层蛋白LaminA/C作为候选基因作突变的筛选，以发现其遗传规律 材料和方法 标本样品：家系所有成员抽取外周血置于EDTA抗凝管5ml×2管，混匀后置于-80℃冰箱中保存。 正常对照取自中山大学遗传学教研室采集的正常志愿者血样本。 外周血基因组DNA的提取：采用QIAamp DNA kit抽提DNA，按照试剂盒附带的说明书进行。 LMNA基因的聚合酶链扩增：对LMNA基因的全部12个外显子、外显子-内含子交界区设计引物，进行聚合酶链（PCR）扩增。 PCR扩增 反应体系：PCR Buffer3μL、4种dNTP各20 mmol/L、MgCl2 1.6 mmol/L，上游和下游引物各0.17 μmol/L、Taq DNA聚合酶1.2 U，加ddH20至30μL。 扩增程序：反应条件为：94 ℃预变性3 min； 94 ℃变性30 s、54℃退火45 s、72 ℃延伸45 s、共35个循环；最后72 ℃延伸10 min。反应在Geneamp 9700 PCR仪上完成。 测序 程序：PCR产物经ExcolⅠ 和SAP预反应，以去除多余的引物和dNTP，然后以BigDye按标准程序进行正反双向测序（98℃2分钟，96℃10秒，50℃5秒，60℃4分钟，30次循环；4℃恒温保存。） 产物经纯化以清除多余的原料和非特异性产物；最后在ABI 3100测序仪上进行分析。 结果 系谱图：先证者为Ⅲ5。该家系共四代，目前存活的共30人，有27人参与了调查，其中男性14人，女性13人；年龄0.5~72岁，平均年龄23.5±7.5岁。 临床特点 所有患者均有四肢肌无力和肌萎缩，以肩胛带和骨盆带明显，病程长者较病程短者萎缩更为明显；所有患者无关节挛缩，无腓肠肌假性肥大。 先证者为43岁男性 患者有胸闷、心悸、活动后气促等病史一年余，经心电图证实为心房颤动并Ⅲ°房室传导阻滞、室性早搏；行心脏彩超示心脏扩大。 给予安置VVI起搏器。 临床特点 先证者的大姐 （ Ⅲ 2） 和二姐（ Ⅲ 3）均有肌营养不良病史，均已发生猝死，其中二姐在医院死亡时经心电图证实为窦性停搏。 Ⅲ11、Ⅲ15及Ⅳ1有心悸 表2 患者心肌酶及肌钙蛋白T结果 表3 超声心动图结果 结果—基因检查 4名患者及一名表型正常的患者子女Ⅳ5（2岁，目前无症状，为携带者）都存在着LMNA基因c.73CG （g. Arg 25 Gly）突变，家系中所有的正常人以及正常对照都没有该位点的突变。 讨论 家系病变特点总结： FDC表现 符合常染色体显性遗传 临床及肌肉病理提示合并肌营养不良；Dystrophin(+)。 讨论 家系病变特点总结： 分子遗传学分析证实LaminA/C编码基