羊口疮病毒贵州株B2L基因克隆及其分子特征分析.docVIP

羊口疮病毒贵州株B2L基因克隆及其分子特征分析 　　摘要：根据已发表的ＯＲＦＶ Ｂ２Ｌ基因序列设计引物，进行Ｂ２Ｌ基因的特异性扩增，并将其克隆到ｐＭＤ１８－Ｔ载体后进行测序。结果表明，贵州株的Ｂ２Ｌ基因长为１ １３７ ｂｐ。核苷酸序列比较、分析，结果表明，贵州株与湖北株（ＧＵ３２０３５１）同源性最高，达９９．１％，与２００３年北美分离株（ＡＹ２７８２０８）和２００３年美国动物园分离株（ＡＹ４２４９７１）同源性最低，为９７．１％，所推导氨基酸的同源性为96.3%~99.5%。说明贵州株Ｂ２Ｌ基因与参考毒株之间差异不大。该研究为贵州省羊口疮病毒疫苗选择提供理论基础。 　　关键词：ＯＲＦＶ；克隆；序列分析 　　中图分类号：Ｓ８５２．６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1842-04 　　 　　Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂ２Ｌ Ｇｅｎｅ ｏｆ Ｏｒｆ Ｖｉｒｕｓ Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ Ｇｕｉzｈｏｕ 　　 　　ＸＩＡＮＧ Ｚｈｉ－ｌｏｎｇ１，ＺＨＵＯ Ｊｉａｎ－ｈｕａ2，ＣＨＥＮＧ Ｚｈｅｎ－ｔａｏ１，3，ＸＩＡＮ Ｓｉ－ｍｅｉ１，3，ＯＵ Ｄｅ－ｙｕａｎ１，3，ＹＩＮ Ｃｈｕａｎ－ｂａｏ１，ＬＩＵ Ｔｉｎｇ－ｊｉａｎｇ１ 　　（1.Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５，China； 2． Ｔｈｅ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ｏｆ Ｊｉｎｇｓｈａｎ Cｏｕｎｔｒｙ， Jinshan ４３１８００，Ｈｕｂｅｉ，China； 3． Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｉｎｓｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５，China） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ Ｂ２Ｌ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＯＲＦＶ ｓｔｒａｉｎ ｉｎ Ｇｅｎbａｎｋ，ｏｎｅ ｐａｉｒ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ．Ｔｈｅ Ｂ２Ｌ ｇｅｎｅ ｏｆ ｏｒｆ ｖｉｒｕｓ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｐＭＤ１８－Ｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ． Ｔｈｅ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ １ １３７ ｂｐ． Ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ Gｕｉｚｈｏｕ strain ａｎｄ ｔｈｅ Hｕｂｅｉ strain（ＧＵ３２０３５１）ｗａｓ ９９．１％， ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Gｕｉｚｈｏｕ strain ａｎｄ ｔｈｅ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｏｒｆ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ（ＡＹ２７８２０８）ｉｎ ２００３， ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｅｄ strain ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｒｕｍｉｎａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ａ ｚｏｏ（ＡＹ４２４９７１） ｉｎ ２００３ ｗａｓ ９７．１％． Ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｈａｒｅｄ ９６．３％ to ９９．５％． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ａ ｌｉｔｔｌｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Gｕｉｚｈｏｕ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒ???ｎｃｅ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ． Ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｔｈｅ Oｒｆ ｖｉｒｕｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｆｏｒ Gｕｉｚｈｏｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＯＲＦＶ； cｌｏｎｅ； sｅｑｕｅｎｃｅ aｎａｌｙｓｉｓ 　　羊口疮（Ｏｒｆ）是由羊口疮病毒（Ｏｒｆ ｖｉｒｕｓ，ＯＲＦＶ）引起的绵羊、山羊的一种接触传染性、嗜上皮性、人兽共患的传染病［１］。ＯＲＦＶ在养羊的国家和地区普遍发生，常呈群发性流行［２］，是严重威胁养羊业，具有重要经济意义的病毒病之一［３］。我国甘肃、宁夏、四川、江苏、云南、青海、陕西、山东、内蒙、新疆、贵州、黑龙江等省区均有此病的流行与报道［４－９］。ＯＲＦＶ为痘病毒科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）、副痘病毒属（Ｐａｒａｐｏｘｖｉｒｕｓ）成员，为有囊膜线性双股ＤＮＡ病毒，基因组大小约１３５．０～１４８．１ｋｂ［１０］， Ｇ＋Ｃ含量约６４％［１１］；目前公认含１６个开放阅读框（ＯＲＦ），由１３０个编码结构蛋白与非结构蛋白的基