igfi 醛固酮对成纤维细胞的作用及对弹性蛋白表达的调节及其机制探讨-effects of igfi aldosterone on fibroblasts, regulation of elastin expression and its mechanism.docx

下载文档 降价啦

0
0
约8.96万字
约 98页
2018-05-29 发布于上海
举报
版权申诉
保障服务

igfi 醛固酮对成纤维细胞的作用及对弹性蛋白表达的调节及其机制探讨-effects of igfi aldosterone on fibroblasts, regulation of elastin expression and its mechanism.docx

1、本文档共98页，可阅读全部内容。
2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。

igfi 醛固酮对成纤维细胞的作用及对弹性蛋白表达的调节及其机制探讨-effects of igfi aldosterone on fibroblasts, regulation of elastin expression and its mechanism

中文摘要成纤维细胞是皮肤真皮中的主体细胞成分，在皮肤老化过程中扮演着重要的角色。成纤维细胞合成弹性蛋白减少、弹性纤维减少、卷曲，使皮肤弹性下降、松弛，出现皱纹。目的：本课题着眼于与皮肤衰老密切相关的皮肤成纤维细胞，研究IGF-I、醛固酮对皮肤成纤维细胞增殖的影响，同时通过研究IGF-I、醛固酮对皮肤弹性蛋白的合成的影响，探讨醛固酮发挥作用的途径，观察醛固酮对IGF-I信号通路的影响、作用靶点，并探讨其可能机制。方法：1.MTT法检测不同时间不同浓度IGF-I对皮肤成纤维细胞增殖的影响，分为调零组、对照组、50ng/mlIGF-I、100ng/mlIGF-I、200ng/mlIGF-I、500ng/mlIGF-I组,连续观察12h，24h，48h，72h，96h。2.MTT法检测不同时间不同浓度醛固酮对皮肤成纤维细胞增殖的影响：调零组、对照组、10nmol/L醛固酮、50nmol/L醛固酮、1μmol/L醛固酮组，连续观察12h，24h，48h，72h，96h。3.免疫荧光法检测不同浓度IGF-I对弹性蛋白的调节：制作细胞爬片，按照50ng/mlIGF-I、100ng/mlIGF-I、200ng/mlIGF-I、500ng/mlIGF-I浓度梯度加药，并设阴性对照。4.免疫荧光法检测不同浓度醛固酮对弹性蛋白的调节：按照10nmol/L醛固酮、50nmol/L醛固酮、1μmol/L醛固酮浓度梯度加药，并设阴性对照。5.免疫荧光法检测醛固酮对弹性蛋白调节机理的探讨：根据实验结果筛选出最佳浓度醛固酮，分别与最佳浓度IGF-I、极量IGF-I以结合全部IGF-I受体、醛固酮受体拮抗剂安体舒通共同孵育细胞，并设阴性对照。酪氨酸酶抑制剂分别与最佳浓度的醛固酮、IGF-I作用于细胞，磷脂酰基醇抑制剂分别与最佳浓度的醛固酮、IGF-I作用于细胞，并设阴性对照，细胞免疫荧光及共聚焦观察弹性蛋白的变化。7.Westernblot半定量检测醛固酮对弹性蛋白调节机理的探讨，进一步印证免疫荧光的结果。结果：I1.MTT法检测不同时间不同浓度IGF-I对皮肤成纤维细胞增殖的影响：与对照组相比50ng/mlIGF-I、100ng/mlIGF-I与200ng/mlIGF-I组有明显差异，大于对照组，P0.05；与50ng/mlIGF-I比较100ng/mlIGF-I与200ng/mlIGF-I组有明显差异，大于该组，P0.05；100ng/mlIGF-I与200ng/mlIGF-I组间无明显差异。与对照组比较500ng/mlIGF-I组有明显差异，小于对照组，P0.05。2.MTT法检测不同时间不同浓度醛固酮对皮肤成纤维细胞增殖的影响：与对照组相比各时间段50nmol/L醛固酮组及12h、96h10nmol/L醛固酮组有明显差异，大于对照组，P0.05；各时间段50nmol/L醛固酮组与10nmol/L醛固酮比较有明显差异，大于该组，P0.05。1μmol/L醛固酮组与对照组比较有明显差异，小于对照组，P0.05。.免疫荧光法检测不同浓度IGF-I对弹性蛋白的调节：50ng/mlIGF-I组、100ng/mlIGF-I组、200ng/mlIGF-I组、与空白对照组比较，随着IGF-I浓度的增加，成纤维细胞内弹性蛋白的比例逐渐增加，100ng/mlIGF-I组、200ng/mlIGF-I组为最佳浓度组，500ng/mlIGF-I组与空白对照相比较，比例下降。.免疫荧光法检测不同浓度醛固酮对弹性蛋白的调节：10nmol/L醛固酮组、50nmol/L醛固酮组、并与空白对照组比较，发现随着醛固酮浓度的增加，成纤维细胞内弹性蛋白的比例逐渐增加，50nmol/L醛固酮组为最佳浓度。1μmol/L醛固酮组与空白对照相比较，未见明显变化。.免疫荧光法、WesternBlot法检检测醛固酮对弹性蛋白调节机理的探讨发现：与50nmol/L醛固酮组相比，50nmol/L醛固酮+安体舒通2um/ml组、50nmol/L醛固酮+100ng/mlIGF-I成纤维细胞内弹性蛋白的比例增加，50nmol/L醛固酮+1000ng/mlIGF-I组成纤维细胞内弹性蛋白的比例降低，各组成纤维细胞内弹性蛋白的比例均高于空白细胞组。与空白对照相比，100ng/mlIGF-I+酪氨酸激酶抑制剂组比例增加，余醛固酮50nmol/L+酪氨酸激酶抑制剂1umol/L组、醛固酮50nmol/L+磷脂酰基醇抑制剂1umol/L组、100ng/mlIGF-I+磷脂酰基醇抑制剂1umol/L组未见明显变化。100ng/mlIGF-I+酪氨酸激酶抑制剂PP210umol/L共同孵育细胞，弹性蛋白的量增多；50nmol/L醛固酮+1000ng/mlIGF-I组、醛固酮50nmol/L+酪氨酸激酶抑制剂1umol/L组、醛