减数分裂抑制剂对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力影响-effect of meiosis inhibitor on in vitro maturation and embryonic development ability of porcine oocytes.docxVIP

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2018-05-28 发布于上海
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减数分裂抑制剂对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力影响-effect of meiosis inhibitor on in vitro maturation and embryonic development ability of porcine oocytes.docx

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减数分裂抑制剂对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力影响-effect of meiosis inhibitor on in vitro maturation and embryonic development ability of porcine oocytes

照组53.43%都有极显著的提高（P0.01）。第二章为研究减数分裂抑制剂cilostamide对猪卵母细胞微丝微管的影响。研究结果发现，GV期和GVBD期，微丝集中在皮质区域；Pro-MI期、MI期和AI-TI期，微丝分布在染色体周围；MII期，微丝随着极体排出细胞外，分布在极体周围。GV期和GVBD期，未观察到微管的存在；Pro-MI期，微管形成，并包裹在染色体周围；MI期，微管行成纺锤体，分布在染色体周围，可观察到垂直或者平行的状态；AI-TI期，微管仍以纺锤体形式存在，位于两团染色体中间；MII期，微管以纺锤体形式分布在染色体周围，同样可观察到垂直或者平行的状态。猪卵母细胞细胞在不同浓度cilostamide抑制培养不同时间，解除抑制培养44h，成熟的MII期卵母细胞，微丝微管形态和染色体排列与对照组无差异。Cilostamide不影响猪卵母细胞细胞骨架。第三章为探索减数分裂抑制剂cilostamide对猪体外胚胎发育潜力的影响。猪卵母细胞在含有20μMcilostamide的IVM培养液中培养22h，解除抑制剂后再常规培养44h，成熟的卵母细胞进行孤雌激活和体外受精。孤雌激活试验组卵母细胞的分裂率、囊胚率、囊胚细胞数均略高于对照组，但差异不显著（97.78%vs92.18%，40.72%vs35.09%，71.91vs64.20，P0.05）。体外受精试验组，卵母细胞的卵裂率、囊胚率均显著高于对照组（73.10%vs68.34%，P＜0.05；10.05%vs8.20%，P＜0.05）；试验组的囊胚细胞数高于对照组，但差异不显著（71.91vs64.20，P0.05）。以上实验结果表明，PDE3抑制剂cilostamide能可逆的抑制猪卵母细胞减数分裂，提高卵母细胞发育能力，对微丝微管形态和染色体排列并未产生不利影响。关键词猪卵母细胞Cilostamide减数分裂微丝微管发育能力EFFECTOFMEIOTICMITOSISINHIBITORONMATURATIONANDDEVELOPMENTOFPROCINEOOCYTESABSTRACTInvitromaturationofpigoocytehadbeenstudiedfordecades,buttheefficiencyofinvitroembryoproductionandsomaticcellnucleartransfer(SCNT)remainslimited.Asynchronousofcytoplasmicandnuclearmaturationmaybeoneofthemainfactorsaffectingthesubsequentdevelopmentcompetenceofprocineoocytes.ThisstudyaimedtoimprovetheoocytedevelopmentcapacityregulatedbymeioticmitosisInhibitor.Inthefirstexperiment,theoptimumeffectivedoseandcultureperiodoftimeswithcilostamideweredetermined.Oocyteswererandomlyculturedinthefollowing4groups:mediumwithouttheinhibitorcilostamide(control)(i)andmediumsupplementedwithcilostamideof20μM(ii);40μM(iii);60μM(iiii).Oocytesingroups(ii)(iii)and(iiii)wereexposedtocilostamidefor11h,22hand33h,respectively.GVarrestwasassessedduringtheinvitromaturation(IVM)at11h、22hand33h.ThecilostamidewassubsequentlyremovedbytransferofoocytestoafreshIVMmedium.ThenthepercentageofoocytesmaturedtometaphaseIIwerecalculated.Theresultshowedthatgroupsexposedto40μMand60μMcilostamidehadasignificantlyhigherproportionofoocytesarrestedatGVstage(44.50%,48.60%vs34.67%,P0.05),whilegroupexposedto20μMcilostamidewasincreased,butnotsigni