细菌病的一搬诊断程序 教学文稿.pptVIP

第三节 细菌的人工培养 是指把细菌生长繁殖所需的各种营养物质 合理地调配在一起制成的营养基质。 一、培养基的概念 二、培养基种类 液体培养基、固体培养基和半固体培养基三种。 液体培养基：含有各种营养成分的水溶液。 固体培养基：在液体培养基中加入2～3%琼脂即为固体培养基。 半固体培养基：加入0.3～ 0.5%琼脂即为半固体培养基。 (一)按其物理性状分为 1、基础培养基 含有培养一般细菌的最基本成分。可供大多数细菌人工培养用。如肉汤培养基、普通琼脂培养基和蛋白胨水等。 (二)按其用途分为 2、营养培养基 于基础培养基中加入高营养物质如葡萄 糖、血液、血清、腹水、生长因子等，以 满足营养要求较高的细菌生长需要。有的 细菌还需加入特殊物质，如结核杆菌需加 入鸡蛋清、马铃薯、甘油等才能良好生长。 3、选择培养基 在培养基中加入某些化学物质，而选择性地让欲分离的细菌旺盛生长的培养基，使用后可以达到选择分离的目的。如胆盐和蔷薇色酸可以选择性地抑制G+菌的生长，而不影响Gˉ菌的生长。在培养基中加入二药后可选择性地分离出肠道杆菌。 区分选择培养基和鉴别培养基 选择培养基上的菌类，有2种或两种以上时，只有适应环境（选择培养基的基底）的菌种才能存活。 鉴别培养基上的菌类，有两种或两种以上时，在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物（但培养基上的各个菌种均不死亡）。 三、制备培养基的基本程序 配料 溶化 测定及矫正pH 过滤 分装 灭菌 无菌检验 备用 培养基的基本要求 1.含有丰富的营养物质，不含任何抑菌物质。 2.具有适当的pH值和水分。 3.均匀透明，易于观察。 4.经过灭菌和无菌检验。 1、细菌在固体培养基上的生长现象： 观察细菌在平板上的菌落特征： 菌落：细菌接种在固体培养基上，经过一定时间的培养后，表面可出现肉眼可见的单个细菌集团，称为菌落。 四、细菌在培养基上的生长情况 形态、大小、边缘、表面构造（湿润度和光滑度）、隆起度、透明度、颜色等，及在血平板上的溶血现象（β溶血、α溶血）。 2、细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛的细菌，沿穿剌线呈模糊羽毛状生长。 无鞭毛的细菌，沿穿剌线呈清晰的线状生长。 3、细菌在液体培养基中的生长现象 观察肉汤培养物的混浊度、管底沉淀、肉汤表面菌膜或菌环，以及有无汽泡等。 ⑴ ⑵ ⑶ ⑷ 临床标本 预处理 增 菌 接种培养基，分离单个菌落 各种鉴定试验 涂片染色 快速诊 断试验 生化试验 血清学实验 涂片染色 药敏试验 动物试验 初步诊 断报告 最终诊断报告 第四节 细菌病的一般诊断程序 一、病料的采集、保存及运送 1）尽早采集 一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验，尽早获得病原学诊断和抗生素敏感资料，对细菌感染的治疗具有极其重要意义； 2）标本采集尽量在用药前进行； 3）根据可疑病原菌和实验方法的不同选择合适的采集时期； 4）注意无菌操作，尽量避免杂菌污染； 5）注意采集的方法和部位； 6）标本必须新鲜，及时运送； 7）标本的保存、处理要严格。 二、细菌的形态检查 1.单染色法 2.复染色法 革兰氏（G）染色法 革兰氏阳性菌（G+菌）－蓝紫色 革兰氏阴性菌（G-菌）－红色 * * 液体（肉汤）培养基： 蛋白胨 10g， 牛肉膏 5g， NaCl 5g， 常水 1000ml。 制作时，将各成分加热翥沸溶液，校PH7.6-7.8，过滤分装，高压灭菌30min备用。 牛肉浸液（代替牛肉膏）制备：新鲜精牛肉500g，去除筋腱，切碎，加1000常水煮沸，过滤，置冰箱过夜，其上清液即可。 固体（琼脂）培养基： 琼脂 2-3g 肉汤 100ml 琼脂——是海澡中提炼的多糖质，它不能 被细菌所利用，而只起凝固的作用。