双向电泳简介.pptVIP

双向电泳简介及其在园艺学中的应用;双向电泳的定义;双向电泳的原理;双向电泳的分类;3、非变性/还原/SDS-2D： 非变性条件下IEF聚焦，之后用8M尿素＋5%β-ME＋2%SDS进行平衡，再进行第二向SDS-PAG电泳。此时分离的蛋白质点可进行点的切取、蛋白酶消化、MALDI-TOF-MS分析鉴定，提供关于断裂二硫键连接的多肽的信息。;4、变性2D： 样品先用2%SDS＋5%β-ME＋95℃变性5min，IEF在8M尿素＋1%NP-40条件下进行，之后胶条用2%SDS＋5%β-ME平衡，然后进行SDS。该技术适于DNA序列和多肽结构的分析，或分析被碳氢键连接和其它翻译后修饰所引起的多肽结构微异质性，但此方式显示的大于100Kd的蛋白质点少于第三种方式 ;双向电泳的流程;流程图;仪器设备;双向电泳的优缺点;双向电泳的在园艺学中的应用; 杂交是导致基因表达差异的主要原因，用双向电泳比较甘蓝的单、二和四倍体来研究基因组加倍的问题。 Albertin等*发现器官间和基因型间的差异决定了蛋白总数的差异，但倍体水平、叶和茎蛋白在两个甘蓝品系中没有变化。 * Albertin W, Brabant P, Catrice O, et al. Autopolyploidy in cabbage (Brassica oleracea L.) does not alter significantly the proteomes of green tissues. Proteomics. 2005,5(8):2131-2139; 从食物营养的角度看，决定一种转基因食品是否完全与它来源的传统食品一致，“绝对等价”是广泛被接受的标准，双向电泳是最适当的分析方法之一，鉴定前进行很多成分的即时筛选。 Corpillo等*将有相同遗传背景的两种西红柿苗的其中一种由遗传工程引入抗病毒特性，双向电泳谱显示定性和定量上都无明显不同，表明主要蛋白的表达并未因遗传工程操作而改变。 * Corpillo D, Gardini G, Vaira AM, et al.Proteomics as a tool to improve investigation of substantial equivalence in genetically modified organisms: the case of a virus-resistant tomato. Proteomics. 2004,4(1):193-200; Storf等*用双向电泳分析西红柿和豌豆的光合体系，发现每个Lhca蛋白都含 4-10个不同等电点的异构体，提出不同的Lhca成分PSI可能存在几个类别。此外，马铃薯中已经开展翻译后修饰蛋白的研究，并发现一些丰度很低的新超级复合物。 * Storf S, Stauber EJ, Hippler M, et al. Proteomic analysis of the photosystem I light-harvesting antenna in tomato (Lycopersicon esculentum).Biochemistry. 2004,43(28):9214-9224 ; 　　　不利的环境条件同样对蔬菜、水果产生影响，导致疾病或耐受反应，影响细胞的生存。 　　　 Monteiro等*利用双向电泳分析发现葡萄中主要蛋白的表达和积累可通过葡萄成熟阶段的环境和／或病态条件来检测，在成熟的浆果中与病原相关的蛋白谱无品种差异。 * Monteiro S, Picarra-Pereira MA, Teixeira AR, et al. Environmental conditions during vegetative growth determine the major proteins that accumulate in mature grapes. J Agric Food Chem. 2003,51(14):4046-4053 ; 通过双向电泳技术，Walz等*对黄瓜和南瓜植物的韧皮分泌物中的45个蛋白进行鉴定，表明大部分蛋白参与胁迫和保护反应。 * Walz C, Giavalisco P, Schad M, et al. Proteomics of curcurbit phloem exudate reveals a network of defence proteins. Phytochemistry. 2004,65(12):1795-1804 ; 酶降解比干旱引起损伤的表达差异更明显。开花末