cr16低表达影响小鼠睾丸支持细胞结构和功能的分析word格式论文.docxVIP

英文缩略词表缩写英文全称中文全称Arp2/3 BTB cDNACdc42CR16Actin-related proteins 2/3 blood-testis barrierComplementary deoxyribonucleic acid Cell division control protein 42Corticosteroids and regional expression 16肌动蛋白相关蛋白 2/3 血睾屏障 反向转录脱氧核糖核酸 细胞分裂调控蛋白 42糖皮质激素区域表达基因DABDiaminobenzidine16二氨基联苯DEPC DMSO DNA EBEDTADiethypyrocarbonate Dimethyl sulfoxide Deoxyribonucleic acid Ethidium bromideEthylenediaminetera-aceticacid焦碳酸二乙酯二甲基亚砜 脱氧核糖核酸 溴化乙锭 乙二胺四乙酸二钠EGTAEthyleneglycolbis(2-aminoethyl ether)-N,N,N’,N’-tetraacetic acid乙二醇-双-（2-氨基乙基）-四乙酸FBSFetal bovine serum胎牛血清FITCFluorescein isothiocyanate异硫氰酸荧光素HSHorse serum马血清mRNAmessenger ribonucleic acid信使核糖核酸N-WASPNeural Wiscott-Aldrich syndrome protein神经型威奥综合症蛋白PBSPhosphate Buffered Solution磷酸盐缓冲溶液RT-PCRreverse transcript polymerase chain reaction逆转录－聚合酶链反应RNAiRNA interferenceRNA 干扰SspJsSertoli cell-spermatid junctions支持细胞与生精细胞连接区TM4Mouse testis sertoli cell line小鼠睾丸支持细胞TEMTransmission electron microscope透射电镜WASPWiscott-Aldrich syndrome protein威奥综合症蛋白Toca-1transducer of cdc42-dependent actin assemblyCdc42 依赖的肌动蛋白传感器组装TGF-β3Transforming growth factor- beta three转化生长因子β3ICCImmunocytochemistry免疫细胞化学DMEM/F12Dulbeccos Modified Eagle Media: Nutrient Mixture F-12DMEM/F12 培养液CR16 低表达影响小鼠睾丸支持细胞结构和功能的研究华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030硕士研究生符小春导师相文佩副教授中 文 摘 要实验一小鼠睾丸支持细胞培养及 CR16 干扰序列的筛选目的 ：采用化学合成的小分子干扰 RNA（siRNA）转染小鼠睾丸支持细胞株 TM4 细胞，观察 CR16mRNA 和蛋白表达情况，筛选出 CR16-siRNA 的有效干扰序列， 为后续的实验提供研究基础。方法 ：在 TM4 有内源性表达 CR16 的基础上，针对小鼠 CR16mRNA 靶序列设 计三段不同的 CR16 干扰序列（si-CR16 序列 1、 2、 3），通过荧光标记的 siRNA（cy3-CR16-siRNA）确定最佳转染浓度后，在脂质体 Lipofectamine2000 介导下 分别用三段 si-CR16 序列转染 TM4 细胞，设立空白对照组（未转染）、试剂对照 组（加 Lipofectamine2000）和阴性对照组（转染阴性 siRNA 序列，N-control siRNA）。采用实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）和 Western-Blot 技术分别检测转染 后 48h 各组细胞 CR16mRNA 和 72h 蛋白的表达情况，确定 si-RNA 的最优干扰 序列。结果 ： TM4 细胞内源性表达 CR16。Cy3-siRNA 转染 TM4 细胞后，20nM 组可 见微弱的红色荧光，随着转染浓度的增加，表达红色荧光的 TM4 细胞增多，以 50nM 和 100nM 最为明显，根据实验有效性和节约性原则，选定 50nM 作为 CR16-siRNA 的有效转染浓度。三种 si-CR16 序列转染 TM4 细胞 48h 后，CR16mRNA 相对表达量均较空白对照组显著下降（P0.01），以 si-CR16 序列作用最明显，而 si