饲料中牛、羊源成份的检测研究进展.pptVIP

饲料中牛、羊源成份的检测方法研究进展 上海市兽药饲料监察所 顾 欣 饲料中牛、羊源成份检测的方法 Microscopic analysis显微镜检法 Near infrared spectroscopy近红外光谱法（NIRS） Near infrared microscopy 近红外显微镜检法(NIRM) Enzyme-linked immunosorbentassay酶联免疫法(ELISA) polymerase chain reaction聚合酶链反应(PCR) Microscopic analysis显微镜检法 欧盟唯一承认的官方方法 鉴别：饲料中的动物源性成份 鱼对陆生生物 哺乳动物对非哺乳动物 饲料中MBM的检测限LOD：0. 1% 热稳定性 Microscopic analysis显微镜检法 缺点： 主要是针对骨头碎片的鉴别 不能应用于液体样品 使用有机溶剂沉淀骨头碎片 费用高（仪器和时间） 需要有丰富的分析经验 显微镜检法图例 显微镜检法图例 显微镜检法图例 近红外光谱法（NIRS） 鉴别： 饲料中的动物源性成份 鱼对陆生生物 已有高通量的自动化设备 筛选方法 可以定量分析 饲料中MBM的检测限LOD：1% 近红外光谱法（NIRS） 缺点： 需要数据库的支持 不准确，需确认方法进一步确认 近红外光谱法（NIRS） 需解决的问题 需构造大型数据库 提高检测限 近红外显微镜检法(NIRM) 鉴别： 饲料中的动物源性成份 鱼对陆生生物 不需要骨头碎片的存在 可以检测饲料中所有的颗粒（如肌肉、骨头等） 可以定量分析 饲料中MBM的检测限LOD：0. 1% 热稳定性 近红外显微镜检法(NIRM) 缺点： 需要数据库的支持 不能进行种特异性的鉴别 不能应用于液体样品 限用于50um-100um的颗粒 费用高（仪器） NIRM分析前如需沉淀，则需使用有机溶液 近红外显微镜检法(NIRM) 需解决的问题 需研制哺乳动物对非哺乳动物的鉴别方法 NIR Camera或NIR imaging system 酶联免疫法(ELISA) 鉴别： 种特异性鉴别 快速、费用，可作为筛选方法 直接检测蛋白质，不需要骨头 可应用于液体样品 LOD：0.01% 酶联免疫法(ELISA) 缺点： 存在牛奶时可能存在干扰 存在明胶时可能存在抑止 对高温的热敏感性 和植物蛋白存在交叉反应 酶联免疫法(ELISA) 需解决的问题 检测的热稳定性 配合饲料的检测 聚合酶链反应(PCR) 鉴别： 类群或（和）种特异性的DNA（脊椎动物、哺乳动物、反刍动物、牛、绵羊、山羊、猪、家禽、马的DNA等） 法律上的有效性 不需要骨碎片的存在 可应用于液体样品 LOD：0.1-0.01% 聚合酶链反应(PCR) 缺点： 费用高（仪器和试剂） 需专用实验室避免交叉污染而引起假阳性 需选择热稳定性的目标扩增产物（加热预处理的MBM） DNA的干扰（存在于牛奶、血液、脂肪类产品中的DNA） 在高温下的热敏感性（140℃） 聚合酶链反应(PCR) 需解决的问题 最有前途的种特异性鉴别方法 检测的热稳定性 PCR和ELISA的比较 PCR和ELISA的比较 * 0.1% 1% 饲料中的检测限 Yes No 法律的有效性 可以自动化 相对费时 样品的预处理 Yes No 需要相当昂贵的设备的试剂 Yes No 实验室的特殊要求 PCR ELISA 特点 试剂易于标准化 易于适应法律的更新 不需要实验动物 根据不同的分类特异性可以调节分析方法 可用以检查MBM是否进行过适当的热处理 需实验动物用于抗体生产 由于抗体质量影响标准化 其它 假阴性：提取物中存在抑止 物质 假阳性：无 假阴性：样品中存在明胶和脂肪 假阳性：植物蛋白的交叉反应 特异性和灵敏性 PCR ELISA 特点 * * *