第二章平面色谱.pptVIP

第2章 平面色谱 2.1.1平面色谱法的分类与原理 平面色谱是一种开放式的离线操作色谱， 分类如下： 纸色谱法 薄层色谱法 薄层电泳法 纸色谱法 薄层色谱法 将固定相于玻璃或铝箔等载板上涂布成均匀的薄层。展开剂（流动相）借助毛细作用从薄层板点样的一端展开到另一端时使不同物质得到分离。 分离原理随固定相不同而异，可分为吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层 以及凝胶薄层等。 电泳法 电泳：带电粒子在直流电场作用下向异性电极移动。 电泳法是指带电荷的被分离物质在纸、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等惰性支持介质上，由于粒子的大小不同，以及所带的电荷种类，数量不同，在一定电场的作用下，向 电荷相反的电极方向以不同速度迁移而得到分 离。 2.1.2保留值 比移值Rf是溶质移动距离与 流动相移动距离之比，即 Rf=1，组分随展开剂至前沿 Rf=0，组分留在原点 所以Rf在0~1之间 若Rf 值的重现性较差时，可将被分离物质与一 参比物在同一薄层分离。参比物比移值Rf (i)与被测 物比移值Rf(s)之比称为相对比移值。 Ri,s的重现性优于Rf值，数值可大于或小于1。 2.1.3分配系数与比移值的关系 两相达到分配平衡时，某组分在固定相中的浓度（Cs）与在流动相中的浓度（Cm）之比称为分配 系数KD ，即 2.1.4平面色谱的特点 与GC和HPLC的比较 试样随流动相移动一定的距离即停止，不被洗脱 流动相的流速不恒定，且无法控制 仪器自动化程度、分辨率、重现性较差 平面色谱独有的优点 操作简单，价格便宜，应用范围广 固定相是一次性使用，样品预处理简单，且试样全部组分均停留在平面上，不会造成检测失落，对未知试样的分析很有利 可同时平行分离多个试样 对成份复杂的试样可采用不同类型的流动相双向展开，提高分离效能 2.2.1滤纸 纸色谱中所用的滤纸性质对分离效果有很大影响。 对滤纸的要求是： 物理性质均匀、 质地均一、厚薄一致，否则斑 点畸形，Rf值改变。 2. 具有一定的机械强度 3. 纤维松紧程度适当 4. 具有一定的纯度 5. 纸面洁净，不含有溶于水及有机溶剂的物质。 色谱用滤纸纤维的方向会影响分离，故每 次展开时,滤纸的纤维方向应一致 商品滤纸有厚纸、薄纸、慢速、快速、中 速等不同类型可供选择 2.2.2薄层板 有资料表明，60%以上的薄层分离用硅胶作为吸附剂，其次为纤维素、氧化铝、聚酰胺、硅藻土等。 硅胶 硅胶是一种弱酸性的多孔性无定形吸附剂，广泛用于酸性和中性化合物的分离。 硅胶表面有很多硅醇基(－Si－OH)，通过硅原 子上的-OH基团与极性化合物或不饱和化合物形成氢 键而表现吸附性能。 硅醇基的数目越大，则吸附能力增强。 硅胶也能吸附水分而成为水合硅醇基。 硅胶的含水量越大，吸附活性越低，吸附能力（活性、活度）一般分为五级： 氧化铝 氧化铝直接由氢氧化铝高温脱水而成，应用范围仅次于硅胶。按制备方法不同，氧化铝可分为三种： 碱性氧化铝：pH = 9～10,可分离合成染料，生物碱等 酸性氧化铝：pH = 4～5，适应于酸性物质的分离 中性氧化铝：pH = 7～7.5，适于分离醛酮，以及对酸碱 不稳定的脂和内酯等化合物 氧化铝的活度与其含水量有关，含水量大，则吸附能力小。 纤维素 纤维素分子中带有许多羟基，亲水性 强，分离原理与纸色谱相似，但分离效果 和分离速度均比纸色谱佳，可以代替纸色 谱 普通纤维素：天然纤维素、高纯度纤维素、微晶纤维素。 乙酰化纤维素：用乙酸将纤维素结构上的 羟基脂化而成，适用于反相色谱。 离子交换纤维素：纤维素经化学反应，使 分子中心的一部分羟基上的氢被阳离子或 阴离子交换基取代而成，具有离子交换树 脂的性质。 聚酰胺 聚酰胺是由酰胺聚合而成的高分子聚合物。薄层色谱中常用的聚己内酰胺，结构如下： 酰胺中心的酰胺基可与酚类、酸类、硝基类等 化合物形成氢键而对这些物质产生吸附作用。 应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离。 葡聚糖 葡聚糖是一种由葡萄糖残基构成的多糖物质。葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖悬浮于有机相中，加入交联剂聚合而成。 在葡聚糖分子上引入有机基团，则可为亲脂性凝胶。 在葡聚糖凝胶上引入羧甲基，磺乙基等，则制成具有离子交换性质的葡聚糖凝胶离子交换剂。 应用：蛋白质、肽、