北师大 细胞生物学 04.2.pptVIP

电子显微镜的基本构造 电镜与光镜光路图比较 电镜与光镜的比较 P505 主要电镜制样技术 ?超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备示意图 ?负染色技术（Negative staining） 染色背景，衬托出样品的精细结构 ?金属投影 ?冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （技术示意图） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面 的蛋白质颗粒和膜表面结构。 快速冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching） ?电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合 而形成的具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁 共振分析技术相结合，是当前结构生物学。 （Structural Biology）——主要研究生物大分子空间结构及其 相互关系的主要实验手段。 P504 三、 扫描遂道显微镜 ?原理：量子力学中的隧道效应 ?装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数 据采集、处理、显示系统。 ?特点：（1） 分辨本领高，（侧分辨率为0.1～0.2nm， 纵分辨率可达0.001nm）； （2）可在真空、大气、液体等多种条件下工作； （3）非破坏性测量。 ?用途：纳米生物学研究领域中的重要工具 CHO细胞的培养 5.The fractionation of a cell’s contents by differential centrifugation Remove tissue Homogenate Speed differential centrifugation Density gradient centrifugation Identify * 2. Electron microscopy Transmission Electron microscopy (TEMs) Scanning Electron microscopy (SE 1) Transmission Electron microscopy (TEMs) 1931 Ruska 1939 Siemens commercialisation, 1945 used in cells, OsO4 1948 Peale Baker bio-section ?  *EM structure:EM consist largely of (1) A cylindrical column (a) Cathode, tungsten wire filament, a source of electron (b) Electromagnet lens, 1000-250,000 X magnification (c) Screen, photographic plate, or film (2) Vacuum system (3) Electronically control console prowerful suppler 104-105V The formation of an image in the TEM depends on the differential scattering of electron by parts of the specimen. The later is proportional to the amount of matter present in that part, that is its mass thickness, which is a measure of the number of atoms per unit area and their atomic density. ?= 150/V  Work V: 104—105 V at 60,000V, ? =0.05 ? theoretically D = 0.61x 0.05 / 1x1= ~0.03 ?