免疫血液学实验室操作技能 舒.pptVIP

免疫血液学实验室操作技能 基本技术 红细胞悬液的制备 3~5人份大量盐水三洗 试管技术：2-5% 玻片技术：10-30% 浓度 压积红细胞（滴） 生理盐水（ml） 用途 1% 1 4 直抗 2% 1 2 效价测定 5% 1 0.8 间抗、试管法 10% 1 0.4 亲和力、玻片法 补 体 灭 活 每1ml血清加0.1ml 4.45%K2EDTA(PH7.0) 56℃加热灭活56℃30min ABO正反定型 操作方法包括： 试管法，玻片法（平板法、纸板法），微量板法（U型、V型）和凝胶法。 试剂和红细胞的比例2~3:1 反应时间 结果观察 Rh血型鉴定 Rh阴性筛选 Rh阴性确认试验 C，c， E， e抗原鉴定 。 抗体效价测定 倍比稀释 各种介质 效价测定的准确性 抗体效价测定的积分计算 符号 解释 效价评分 4+ 一个结实的凝集块 12 3+ 几个大的凝集块 10 2+ 中等大的凝集块 ，背景清晰 8 1+ 小凝集块，背景浑浊 5 W+ 微小凝集块，背景浑浊 2 0 无凝集和溶血 0 PH 部分溶血，有些细胞残留 H 完全溶血，无细胞残留 DCP 混合外观，一个凝集块，其余全是散在游离细胞 抗体亲和力测定 主要用于鉴定血型抗体试剂的质量。 盐水介质抗体（多数为IgM型抗体）的亲和力可以通过测定导致红细胞凝集的时间长短来确定 抗体亲和力越高，红细胞凝集出现得越快， 非盐水介质抗体（多数为IgG型抗体）的亲和力可以通过红细胞吸收放散试验来确定。 血型物质中和试验 用于测定人分泌液中的血型物质。 抑制红细胞凝集的发生，可以鉴别血型物质的类别和含量。 唾液，羊水，血清中的血型物质检测。 聚凝胺试验 本实验用于检测IgG类血型抗体。 主要的优点是快速， 需要一定的技术 蛋白酶介质试验 本实验用于检测IgG类血型抗体。 蛋白酶试验主要有两种方法， 一步酶法 二步酶法 酶的配制 酶试验结果的解释 酶引起的多凝集 不同抗体在酶中表现不同（Rh↑Duffy↓） 抗球蛋白试验（直接、间接） 直接抗球蛋白试验用于检测致敏于红细胞上的球蛋白，主要包括补体C3、C4成分和IgG免疫球蛋白； 间接抗球蛋白试验用于检测血清或血浆中的IgG类血型抗体。 IgM灭活后的IgG抗体检查 主要用于产前检查 2-Me和DTT破坏IgM抗体 常用于IgG抗A，抗B的测定 抗体吸收试验 本实验用以间接证明细胞上的血型抗原及其强度，也可用于去除不需要的血型抗体。 针对不同的情况使用不同的方法 抗体吸收试验 冷自身抗体的吸收 采一份抗凝标本置 37 ℃孵育，采另一份不抗凝标本置４℃ 。将温育10min以上的抗凝血样用37 ℃盐水洗涤3次平均分置3个试管中,将待检血清加入其中一管混匀置４℃ 30-60min,使其充分吸收,若吸收不完全,可在另2管重复吸收试验。 抗体吸收试验 温自身抗体的吸收 将患者的红细胞用37 ℃盐水洗涤3次，取1ml压积红细胞+1%木瓜酶1ml 37 ℃孵育10min，红细胞用37 ℃盐水洗涤3次，将压积红细胞分为2等份，1份+ 2ml待检血清37 ℃孵育30min，离心，吸取上清加入另一份压积红细胞中管重复吸收试验。 抗体放散试验 用于鉴定红细胞上是否存在某些抗原，用以获取红细胞上致敏的抗体以备鉴定其特异性，或鉴定血清中是否存在某些抗体。 针对不同的情况使用不同的放散方法 热放散ABO-HDN 乙醚放散Rh-HDN 磷酸氯喹放散不破坏红细胞，易于观察结果 热放散技术 取1份洗涤的压积红细胞，加等量盐水。 混匀在56℃孵育10min，频频加以摇动。 离心分离上清液。 检测上清液，并和最后一次洗涤液做平行试验。 注意事项：（1）离心时容易因冷而使已被放散出的抗体再次与红细胞结合（最好使用预热过的离心杯）。（2）如果需要检测