微生物药物产生菌的保藏.pptVIP

菌种保藏：是应用及研究微生物工作者的一个必要且重要的一门应用学科技术，涉及学科很多，如微生物生理学、生物化学、生态学、遗传学、形态学、分子生物学，以及微生物群的分类等。 菌种保藏必须认识每株菌的形态结构、培养特征、生理生化特性，以及各种微生物的代谢产物，如抗生素、维生素、酶以及氨基酸等，还必须精通各种复杂的保藏技术。 一、菌种保藏的目的 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。 保藏微生物菌种的目的不仅要保存菌株的生命本身，而且还必须要尽可能地使菌株的遗传性状保持不变，同时保证其在整个保存过程中不被他种微生物污染。因此，选择一种能够长期有效且稳定的保藏微生物菌种的方法事关重要。 　　 二、菌种保藏的原理 由于微生物种类繁多，且保存方法的难易程度不同，所以微生物菌种的保藏方法亦有许多。但是不管有多少种菌种保藏方法，其基本原理都要求使微生物的代谢作用降至最低程度，以减少其变异，使菌种处于“体眠”状态，抑制其繁殖能力。（如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或酸碱中和剂等）就微生物本身而言，保藏就是要利用它们处于休眠状态的孢子或芽孢而进行。 一种好的保藏方法首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变，同时还需考虑到方法本身的简便和经济，以便生产上能推广使用。 微生物的生长发育除与营养物质有关外，环境条件也不应忽视，如水份、温度和通气等。 1、水份 是构成生物细胞的主要成份之一，其含量在70％-90％，这是因为水不仅是稀薄啊原生质胶体的主要成份，而且一些营养物质的吸收和废物的排除都必须在水溶液中进行。 水份对微生物的生命活动至关重要，环境过于干燥，微生物就不能生长，不同微生物对干燥的抵抗力不一样；一般没有荚膜和芽孢的微生物对环境的干燥比较敏感。 溶液中渗透压的大小和水中溶质浓度有密切关系。如果环境溶液中溶质浓度过高，溶液的渗透压大，形成生理干燥，因而失去生理活动的能力。 2、通气 氧对微生物的生存有着重要的影响，尤其是需氧微生物，它们的生存必须要有空气。这类需氧呼吸的微生物必须从大气中吸取游离的氧，氧化微生物体内的有机物质，释放能量，它是新陈代谢的一个主要组成部分。 厌氧微生物进行无氧呼吸作用，不需要氧气，如有分子氧存在时，它们反之不能生长甚至中毒死亡。 兼性厌氧微生物在有氧和无氧时都可生活，但代谢途径不一样，产物也不一样。当进行谷氨酸发酵时，当通气量充足时产谷氨酸，当通气量不足时，则产生乳酸和琥珀酸。 3、温度 环境温度不仅影响微生物的生长、发育、数量和分布，而且也影响与微生物有关的其他生态因素。 高温和低温对微生物的影响不同，在高温下微生物死亡的原因可能是由于蛋白质凝固而变性，也可能是由于酶活性的破坏或膜结构和功能发生变化，因而杀死微生物。在生产实践中常利用高温进行灭菌。 微生物死于低温，主要是由于细胞渗透性起变化、脱水、形成冰晶和细胞内外结构遭到破坏的缘故。通常在0-5℃温度下，微生物基本处于休眠状态，因此常用低温冷冻的方法来保藏菌种。 根据微生物生命活动的要素，如水、空气、温度、营养物等方面，采取相应措施，即采取干燥、缺氧、低温、缺营养等措施，使微生物的新陈代谢活动在相当长时间内不活泼，处在生长繁殖受抑制的休眠状态。 首先选择优良菌种，采用微生物休眠体（如分生孢子、芽孢或子囊孢子）或菌丝体进行保存。其次，选用适于微生物休眠的环境，主要是低温、干燥、缺氧、缺营养等几个条件，使微生物暂时保持休眠状态，保持其优良的生产性能，尽可能减低其变异率。 三、菌种保藏的各种方法 （一）传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。 A、传代用的培养基特点 传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。它与微生物代谢过程中产生的酸反应，形成二氧化碳溢出。 B、传代间隔时间 各类微生物间隔时间不同，一般分生孢子、子囊孢子及芽孢的菌株间隔时间可以长些（6-12个月），只形成菌丝体的真菌1-3个月传代一次，无芽孢的细菌1个月传代一次