本科毕业论文--《重金属铬对鲤鱼肝脏过氧化氢酶影响的体外实验研究》.docxVIP

摘要本文研究了铬中毒后的鲤鱼肝脏中过氧化氢酶活力的影响，结果表明受水中铬离子的影响，鲤鱼肝脏内的过氧化氢酶活力在低浓度的铬离子的作用下，受到刺激作用，活力增大，而随着毒物浓度的继续增大，酶活力则开始呈下降趋势。关键词铬鲤鱼过氧化氢酶体外染毒1.引言重金属铬的化合物是环境的重要污染物之一。铬在工业中用途广泛，冶金、机械、医药、化工、油漆涂料等都需要铬，不锈钢中就含有12%铬，涉及面很广。〔1〕铬的生物学特性不仅与生物的种类、pH、温度等条件有关，而且与价态有密切关系。通常认为：金属铬、二价铬无毒，三价铬毒性很小，危害最大的是六价铬的化合物。〔2〕水体中铬污染物的主要来源为电镀铬厂、有关的颜料制造厂及制革厂排放的废水。〔3〕污染水体的铬化合物中的铬有两种价态，三和六价，二者之间的相互转化随水体酸碱度及氧化还原条件而定。六价铬的毒性是三价铬毒性的100倍，三价铬可对胎儿产生致畸作用，而六价铬有致癌作用。从事铬化合物生产的工人肺癌发病率是正常组的几十倍。〔4〕目前动物实验表明，三价铬一样有致癌的危险性。但是铬却是人体必需的微量元素之一，成年人每天对铬的正常摄入量需20—50微克，缺铬可引起脂肪增加、血液中胆固醇升高、糖尿病、动脉粥样硬化症等。〔5〕所以，研究铬的生物效应，具有极其重要的意义。相关资料表明，水体中重金属污染具有以下特点〔6〕：（1）天然水体中只要有微量浓度的重金属即可产生毒性效应。（2）某些重金属有可能在微生物作用下转化为金属有机化合物，产生更大的毒性。（3）金属离子在水体中的转移和转化与水体的酸、碱条件有关，如六价铬在碱性条件下的转化能力强于酸性条件；二价镉离子在酸性条件下易于随水迁移，并易为植物吸收。（4）水中的重金属可以通过食物链，成千上万地富集，而达到相当高的浓度，这样重金属能够通过多种途径（食物、饮水、呼吸）进入人体．甚至遗传和母乳也是重金属侵入人体的途径。（5）重金属进入人体后，能够和生理高分子物质如蛋白质和酶等．发生强烈的相互作用而失去活性，也可能累积在人体的某些器官中，造成慢性累积性中毒。 可见重金属对生物界有着很重要的影响。虽然，国内外曾报道了重金属毒物对鱼，贝，虾等动物体内生化组分的影响研究，其中的铬的研究也不在少数〔7〕，但多为96h活体染毒后，进行LC50检测〔8〕，重金属对鲤鱼过氧化氢酶的离体实验研究尚很少见，即制备过氧化氢酶液，然后活体提取肝脏后进行的体外染毒方式。过氧化氢酶普遍存在于动物、植物与微生物细胞内。它催化分解细胞代谢产生的H2O和还原某些其他氧化物，在调节细胞免于死亡过程中起重要作用。过氧化氢酶含有丰富的巯基，重金属可与酶的巯基或其他活性基因相互作用，从而改变酶的活性，呈现致毒作用。〔9〕本文通过室内实验，对鲤鱼活体提取肝脏后进行的体外重铬酸钾染毒，初步探讨重金属铬对鲤鱼肝脏内过氧化氢酶活力的影响。2.材料与方法2.1 实验材料与器材、试剂2.1.1材料鲤鱼：试验用鱼购于长春市某水产养殖场，体重约一至两斤重，体长约25厘米。个体呈平均水平，健康适龄鱼。2.1.2设备①玻璃匀浆器②解剖器具③普通台式离心机④定时钟⑤恒温水浴⑥滴定管（10ml，酸式）⑦碘量瓶（100ml）2.1.3试剂①0.5mol.L-1H2SO4②10% KI③0.01 mol.L-1 Na2S2O3④0.01 mol.L-1,PH6.8磷酸缓冲液。（A:称取1.3610g的KH2PO4溶至1OOOml， B:称取3.5816g的Na2HPO4溶至1OOOml 。取A与B大致相同体积配成PH6.8的磷酸缓冲液）⑤ H2O2磷酸缓冲液。取1ml30%的H2O2试液，用0.01 mol.L-1，PH6.8的磷酸缓冲液稀释至1OOOml。⑥淀粉指示剂。取0.3g可溶性淀粉，以少量冷蒸馏水拌匀，倒入沸水中，冷却后，加0.1g的Na2CO3，用蒸馏水稀释至50ml⑦1%钼酸铵溶液⑧0.25 mol.L-1蔗糖溶液。⑨0.025 mol.L-1K2Cr2O7。(水溶法配制即可)2.2实验原理过氧化氢酶普遍存在于动物、植物与微生物细胞内。它催化分解细胞代谢产生的H2O和还原某些其他氧化物，在调节细胞免于死亡过程中起重要作用。过氧化氢酶含有丰富的巯基，重金属可与酶的巯基或其他活性基因相互作用，从而改变酶的活性，呈现致毒作用。过氧化氢酶催化分解H2O2，以H2O2消耗量来表示过氧化氢酶的活力。酶活力测定原理如下：动植物和微生物细胞内的过氧化氢酶可催化过氧化氢分解为水和氧分子过氧化氢E2H2O2 O2↑+2H2O当酶与底物（过氧化氢）反应结束后，再用碘量法测定未分解的过氧化氢量。以钼酸铵作催化剂，使过氧化氢与碘化钾反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘。其反应式为：H2O2+2KI+ H2SO4