蛋白质组学课程论文--高效液相色谱简介及其应用.docVIP

高效液相色谱及其应用 摘要：高效液相色谱本文介绍了高效液相色谱法的分类高效液相色谱仪并简述了高效液相色谱法的应用。 关键词： Introduction to High Performance Liquid Chromatography and Its Applications YANG Dan College of Agronomy and Biotechnology, Southwest University, Chongqing 400715, China Abstract: Currently HPLC is an important tool for the classification of substances. Therefore, this paper introduced the related knowledge of HPLC, it is classification, high performance liquid chromatography, and explains the application of HPLC. Key word: HPLC; Drug Testing; Environmental Monitoring 俄国植物学家M. S. Tswett发表了题为“一种新型吸附现象及在生化分析上的应用”的研究论文，文中第一次提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法，后将其命名为色谱法。这种简易的分离技术，奠定了传统色谱法基础。高效液相色谱( high performance liquid chromatography, HPLC)的发展始于20世纪60年代中后期。60年代末科克兰、哈伯、荷瓦斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法正式建立。 HPLC是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法[]与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压；②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍；③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级；④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势；⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点。 1. 高效液相色谱法的分类 根据分离机制不同，高效液相色谱可分四大基础类型分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、凝胶色谱。 1.1 分配色谱法 分配色谱法是四种液相色谱法中应用最广泛的一种。溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶解度较小的组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定液中溶解度较大的组分容易进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离的目的。液-液色谱法与液-液萃取法的基本原理相同，均服从分配定律：K=C固/C液，K值大的组分，保留时间长，后流出色谱柱。 一般将分配色谱法分为液液色谱和键合相色谱两类。液液色谱的固定相是通过物理吸附的方法将液相固定相涂于载体表面。在液液色谱中，为了尽量减少固定相的流失，选择的流动相应与固定相的极性差别很大。由此人们将固定相为极性，流动相为非极性的液相色谱称为正相液相色谱，相反的称为反相液相色谱。键合相色谱的固定相是通过化学反应将有机分子键合在载体或硅胶表面上。 液液色谱的涂渍固定液容易被流动相冲掉而键合相色谱则可以避免上述缺点，化学键合固定相无液坑，液层薄，传质速度快，无固定液的流失。固定液上可以结合不同的官能团，改善分离效能。固定液不会溶于流动相，有利于进行梯度洗提。 1.2 吸附色谱法（液-固色谱） 其固定相为固体吸附剂，这些固体吸附剂一般是一些多孔的固体颗粒物质，在它的表面上通常存在吸附点。因此吸附色谱是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分离的。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质，其中硅胶应用最为普遍。吸附色谱具有操作简便等优点。一般来说液固色谱最适于分离那些溶解在非极性溶剂中、具有中等相对分子质量且为非离子性的试样。此外，液固色谱还特别适于分离色谱几何异构体。 1.3 离子交换色谱法 离子交换色谱法是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的被测离子进行可逆交换，由于被测离子在交换剂上具有不同的亲和力（作用力）而被分离。一般常用的离子交换剂的基