奶制品及饮料中防腐剂的HPLC和GC比对分析.docVIP

奶制品及饮料中防腐剂的HPLC 一、目的要求 （1）熟悉高效液相色谱仪的及（2）了解在食品分析中的应用（3）学习外标法定量的操作步骤 实验原理 食品防腐剂是用于防止食品因微生物引起的变质，提高食品保存性能，延长食品保质期而使用的食品添加剂。防腐剂苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐苯甲酸的毒性比山梨酸强，但因苯甲酸及其钠盐价格低廉，仍作为主要防腐剂使用，主要用于碳酸饮料和果汁。长期过量摄入会对造成一定损害本实验用高效液相色谱法（HPLC）测定奶制品及饮料中山梨酸和苯甲酸的含量样品前处理是分析检测过程的关键环节，检测结果的重复性准确性方法的灵敏度分析速度主要取决于样品前处理。奶制品加入氢氧化钠碱化后，进行超声、加热，使苯甲酸和山梨酸以酸根的形式游离出来。亚铁氰化钾溶液和醋酸锌奶制品中的蛋白质沉淀下来，净化样品。苯甲酸和山梨酸i/As对其质量比mi/ms绘制工作曲线，再根据样品中的山梨酸或苯甲酸相对于癸酸的峰面积，由工作曲线计算出样品中山梨酸和苯甲酸的含量。 三、奶制品及饮料中防腐剂的HPLC仪器 高效液相色谱仪紫外检测器ODS色谱柱（150(4.6mm）50μl微量注射器，ml，100ml容量瓶，超声波清洗机，抽滤装置试剂 液态奶、饮料各若干苯甲酸（分析纯）；山梨酸（分析纯）磷酸二氢钠（分析纯）；水合磷酸氢二钠（分析纯）甲醇（HPLC级）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水并定容至100ml； 醋酸锌溶液：称取21.9g二水合醋酸锌，加水溶解后，再加入32ml冰醋酸，以水定容至100ml； 0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠以水定容至1000ml。标准溶液的苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸0.g，以甲醇溶解，定容。 标准储备液：称取山梨酸0.0g，以甲醇溶解，定容。 苯甲酸、山梨酸混合标准液：量取标准储备液各10ml加入到ml容量瓶中，以水定容至刻度，此溶液浓度为2 mg/L。 分别取苯甲酸、山梨酸标准混合液0.5ml、1.00ml、2.00 ml、5.00 ml、10.00ml于5个25.00 ml的容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。 流动相的配制 分别称取1.g磷酸二氢钠和1.g十二水合磷酸氢二钠，加水00ml溶解，配制成磷酸盐缓冲液。加入ml 甲醇，混匀，超声脱气20分钟。奶制品称取0.0g液态奶于50ml容量瓶中，加入10ml 0.1mol/L氢氧化钠溶液，混匀，超声20min取出，70℃（±5℃）水浴加热10min，冷却至室温后，加入5ml亚铁氰化钾溶液和醋酸锌溶液，用力摇匀，静置30min，使其沉淀。加入甲醇5ml，混匀，用水定容至50ml，混匀后放置1h，取上清液过0.45μm滤膜，进行HPLC分析。 饮料取饮料5ml于25ml容量瓶中，加水定容，进行HPLC分析。 仪器运行 按操作规程开机，使仪器处于工作状态用1%的甲醇水溶液色谱柱。参考色谱条件如下： 流动相：磷酸盐缓冲液-甲醇（体积比），等度洗脱； 流速：0.ml/min； 柱温：室温 进样量：10 μL 检测波长：227nm 8. 标准曲线的绘制 基线走稳后不同浓度的标准溶液10μL，记录各峰的保留时间和峰面积。苯甲酸和山梨酸μL，以确定各的保留时间。 样品分析 样品10μL进样，与苯甲酸和山梨酸的以确认奶制品苯甲酸和山梨酸的出峰位置。记录保留时间及峰面积。 关机 实验完毕，用1%的甲醇水溶液清洗管路及色谱柱，再用100% 甲醇清洗，关机。 数据记录与结果分析 （1）记录实验条件和相关参数 （2）将实验数据列于下表中 标1 标2 标3 标4 标5 山梨酸 保留时间（min） 峰面积(mAu.s) 浓度（mg/L） 苯甲酸 保留时间（min） 峰面积(mAu.s) 浓度（mg/L） （3）绘制标准曲线 （4）计算奶制品及饮料中防腐剂的含量奶制品及饮料中防腐剂的仪器 μl微量注射器，μl微量注射器，ml，100ml容量瓶，超声波清洗机试剂 液态奶、饮料各若干苯甲酸山梨酸标准溶液的苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸g，以溶解。 标准储备液：称取山梨酸g，以溶解称取g，以溶解 苯甲酸、山梨酸混合标准分别取苯甲酸标准储备液标准储备液.00ml、.00 ml、.00 ml、4.00ml、5.00ml于个.00 ml的容量瓶中，用稀释至刻度，摇匀。苯甲酸、山梨酸奶制品 在有机相中加入无水硫酸钠1g，脱水20min，将上清液转移至另一个干燥10ml试